weiminhb

Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-17 12:04:33:
首先是卡那和GFP是同等地轉(zhuǎn)座到基因組上，還是說分成兩段分別插的？
如果是后者，只能說是篩到了具有耐藥性質(zhì)的菌株

這種外源插進(jìn)去的東西會讓基因組不穩(wěn)定，復(fù)制的時候會丟失，所以要挑單克隆

是一起插進(jìn)去的�，F(xiàn)在的問題是：將接合子在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)基變綠了，但是取菌體熒光顯微鏡下觀察，沒有看到綠色熒光，而培養(yǎng)液變綠色了，現(xiàn)在準(zhǔn)備做蛋白電泳，看看有沒有GFP表達(dá)，有沒有誰做過GFP表達(dá)的，GFP是胞內(nèi)還是胞外的？

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6樓2010-11-30 15:03:56

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Originally posted by weiminhb at 2010-11-30 15:03:56:

是一起插進(jìn)去的�，F(xiàn)在的問題是：將接合子在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)基變綠了，但是取菌體熒光顯微鏡下觀察，沒有看到綠色熒光，而培養(yǎng)液變綠色了，現(xiàn)在準(zhǔn)備做蛋白電泳，看看有沒有GFP表達(dá)，有沒有誰做過GFP ...

是不是不小心在GFP加了個神馬分泌的信號
另外有可能是你表達(dá)了毒蛋白，把宿主給殺了，所以……

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7樓2010-11-30 18:28:18

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damaomao

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8樓2012-04-24 11:12:58

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鐵蟲 (初入文壇)

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是不是有可能在傳代過程中，綠色熒光蛋白基因從基因組中轉(zhuǎn)座或是重組消失了？可以在不能檢測到熒光的細(xì)胞中驗(yàn)證一下gfp基因的存在，僅供參考！

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9樓2012-04-24 14:00:54

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emma立夏

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還有一個原因，就是熒光淬滅。所以也有文獻(xiàn)報導(dǎo)說，要加一些固定劑的。記得丙酮是一個很不錯的固定劑。

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10樓2012-05-11 20:32:17

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yili_90

金蟲 (正式寫手)

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將基因插入綠色熒光載體中，并轉(zhuǎn)染進(jìn)入293T細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)，48小時后觀察細(xì)胞沒有發(fā)現(xiàn)熒光，但重組載體測序正常，不知道什么原因

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11樓2014-03-24 22:39:41

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