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weiminhb

鐵蟲(chóng) (小有名氣)

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[交流] 【求助/交流】關(guān)于綠色熒光蛋白表達(dá)問(wèn)題

最近做綠色熒光蛋白的蛋白，將gfp基因轉(zhuǎn)座到受體菌的基因組上，表達(dá)。證實(shí)gfp是插進(jìn)去了的（有kan抗性篩選），第一次熒光顯微鏡檢測(cè)是可以觀察到熒光的，說(shuō)明gfp表達(dá)了，但后來(lái)就觀察不到了，怎么回事呢？是gfp表達(dá)不穩(wěn)定嗎?

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1樓 2010-11-17 09:48:28

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weiminhb

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-17 12:04:33:
首先是卡那和GFP是同等地轉(zhuǎn)座到基因組上，還是說(shuō)分成兩段分別插的？
如果是后者，只能說(shuō)是篩到了具有耐藥性質(zhì)的菌株

這種外源插進(jìn)去的東西會(huì)讓基因組不穩(wěn)定，復(fù)制的時(shí)候會(huì)丟失，所以要挑單克隆

是一起插進(jìn)去的。現(xiàn)在的問(wèn)題是：將接合子在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)基變綠了，但是取菌體熒光顯微鏡下觀察，沒(méi)有看到綠色熒光，而培養(yǎng)液變綠色了，現(xiàn)在準(zhǔn)備做蛋白電泳，看看有沒(méi)有GFP表達(dá)，有沒(méi)有誰(shuí)做過(guò)GFP表達(dá)的，GFP是胞內(nèi)還是胞外的？

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6樓2010-11-30 15:03:56

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小乖小帥

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我的是轉(zhuǎn)到細(xì)胞里，看到綠色熒光蛋白了，所以做了共聚焦，結(jié)果就沒(méi)有看到蛋白表達(dá)，也不知道是怎么回事

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2樓2010-11-17 11:05:02

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lxblxb9

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Originally posted by 小乖小帥 at 2010-11-17 11:05:02:
我的是轉(zhuǎn)到細(xì)胞里，看到綠色熒光蛋白了，所以做了共聚焦，結(jié)果就沒(méi)有看到蛋白表達(dá)，也不知道是怎么回事

我更不知道是怎么回事，
我只想知道你們誰(shuí)能給我綠色熒光蛋白基因

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3樓2010-11-17 11:24:08

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等我問(wèn)清楚了再告訴你啊

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Originally posted by lxblxb9 at 2010-11-17 11:24:08:

我更不知道是怎么回事，
我只想知道你們誰(shuí)能給我綠色熒光蛋白基因

我直接做了轉(zhuǎn)染和篩選，前面的是老師設(shè)計(jì)的，我還不是很清楚，等我問(wèn)清楚了再告訴你啊

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4樓2010-11-17 11:53:20

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