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[交流]
【求助/交流】ATP酶活性測定問題
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實(shí)驗(yàn)過程是這樣的： 取已配制好的葉綠體懸浮液1ml，加入1ml激活液，20℃保溫10min，加牛血清蛋白（10mg/ml）0.1ml停止激活。搖勻后64℃水浴中保溫4min。冷卻后，取三只試管分別取0.5ml上述酶液，各加0.5ml反應(yīng)液，其中2支試管37℃保溫10min，另一支置冰浴中做空白對照。 三只試管各加入0.1ml 20%三氯乙酸停止反應(yīng)，然后3000rad/min離心5min。取上清液0.5ml加入蒸餾水2.5ml，2ml硫酸鹽亞鐵鉬酸銨，搖勻后放置30min，顯色穩(wěn)定后在660nm波長下測定吸光度。 結(jié)果計(jì)算中 葉綠體ATP酶活力[μmolPi/mgChl•h)]= μMPi× （V/V1） × (1000/葉綠素含量) ×（60/t） 上式中：μMPi為所測得的光密度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的無機(jī)磷量； V為反應(yīng)體積； V1為取樣測定的體積； 因葉綠素的量以μg表示，故×1000變?yōu)閙g； t為反應(yīng)時(shí)間。 我現(xiàn)在不知道V,V1,t，各應(yīng)該是多少。 感謝各位幫忙 |
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