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changhailin新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
【討論】LC-MS/MS的問(wèn)題 很多人都能碰到
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本人剛做LC-MS/MS 有幾個(gè)問(wèn)題想和大家討論一下，我所用的是 三重四級(jí)桿，定量牛就不用了。 關(guān)于總離子流圖的 問(wèn)題，想咨詢(xún)下大家， 問(wèn)題（1）我感覺(jué)似乎總離子流圖沒(méi)什么多大的用處，主不過(guò)是用來(lái)找到母離子罷了，TIC峰型的好壞 對(duì)定量有影響嗎？感覺(jué)經(jīng)過(guò)MS1 2的SIM 別的離子也不會(huì)造成多大的影響吧，可能會(huì)有些MATRIX EFFECT。 必須調(diào)整條件得到峰型比較好的TIC嗎？ （2) 我想 同時(shí)測(cè)定個(gè) 物質(zhì)A和B，A的是 極性大的 流動(dòng)相為C ; D 20:80 B是極性小的 流動(dòng)相為C ： D 80:20 我怎么 來(lái)選擇一個(gè)合適的流動(dòng)相比例從而更好的定量呢，這似乎有和第一個(gè)問(wèn)題相關(guān)，如果 TIC沒(méi)什么用的話(huà) 流動(dòng)相選擇偏中間的比例 如C ：D 50;50 ，利用MS的 SIM 功能，即使LC 分開(kāi)的不是很好，對(duì)定量也沒(méi)有什么太大的影響。 不知道這樣做行不行，有前輩 高人指點(diǎn)一下嗎。 這個(gè)問(wèn)題相信困擾著很多人 ，重賞 謝謝 |
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笑盲蟲(chóng)
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- 蟲(chóng)號(hào): 292993
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碰到過(guò)和樓主類(lèi)似的問(wèn)題 uv下峰相應(yīng)很大，但將同樣的方法嫁接到ms上，在tic上就沒(méi)有圖。 首先，在uv上我們加酸或者堿，以及離子對(duì)試劑，是為了保證待分離組分在色譜柱中盡可能以游離態(tài)存在，而保證較好的峰形或者較好的分離度。 其次在質(zhì)譜中，調(diào)酸或者調(diào)堿，是為了保證待測(cè)組分在離子源中具有好的離子化效果。 結(jié)合以上兩種分析，在uv上分離和檢測(cè)相應(yīng)很好的組分，往往在ms上看不到，或者只有微弱的tic響應(yīng)，原因在于待測(cè)化合物在色譜中主要以游離態(tài)存在，進(jìn)行離子化過(guò)程中，其離子化效率受到了抑制。 對(duì)于該問(wèn)題怎么來(lái)解決呢 首先，在不接色譜柱的情況下，通過(guò)兩通直接進(jìn)樣，去摸索待測(cè)組分的最佳離子化條件。比對(duì)該離子化條件與色譜中調(diào)酸調(diào)堿中的區(qū)別，如果差別比較大，最后進(jìn)行柱后離子化條件衍生過(guò)程。實(shí)驗(yàn)看看效果如何。 其次，接上色譜柱，進(jìn)樣品看色譜分離和ms檢測(cè)，又沒(méi)有改善，如果沒(méi)有改善，該考慮ms的離子源是否干凈，已經(jīng)毛細(xì)管是否需要進(jìn)行清洗，如果有改善，在需要對(duì)上述優(yōu)化的條件進(jìn)行微調(diào)，知道得到最佳的分離條件以及最佳的ms結(jié)果為止。 很多蟲(chóng)蟲(chóng)都認(rèn)為色譜方法可以直接移植到ms上，其實(shí)存在這樣的誤區(qū)。 希望對(duì)你有幫助 |
17樓2013-05-10 09:09:01
changhailin
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wangyudong
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3樓2010-11-22 20:58:27
changhailin
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4樓2010-11-22 22:12:28
changchuan
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5樓2010-11-23 16:16:02
changchuan
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changhailin(金幣+1): 2010-11-24 08:37:47
| 至于TIC，是有用的，它首先可以反映你的儀器的狀況，如果它總體趨勢(shì)是平穩(wěn)的，這樣儀器才算穩(wěn)定，忽上忽下就不好了，表明儀器檢測(cè)到的離子流忽強(qiáng)忽弱，那么可能是離子源那里電離不好等等，會(huì)影響檢測(cè)的，比如本可以檢測(cè)到的卻檢測(cè)不到。其次TIC中出的峰和LC出的峰應(yīng)該是一一對(duì)應(yīng)的，如果LC出峰而TIC沒(méi)有，可能是電離不好，比如電離模式?jīng)]有選對(duì)，或者離子源不合適�？傊甌IC是有用的 |
6樓2010-11-23 16:20:27
zhengxim
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7樓2010-11-24 08:10:48
changhailin
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changhailin(金幣+1): 2010-11-24 11:02:18
changhailin(金幣+1): 2010-11-24 16:48:27
changhailin(金幣+1): 2010-11-24 16:48:27
| 你說(shuō)的峰形不好是TIC峰形不好嗎？還是色譜的峰形不好？我沒(méi)有做過(guò)定量，但是TIC得峰形一直是不規(guī)則的吧，本來(lái)就很難讓它像色譜那樣出對(duì)稱(chēng)性好的峰。如果你想它更好一點(diǎn)，可是試試換換參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，就像解決色譜拖尾峰那樣去優(yōu)化條件。另外想知道它是不是純物質(zhì)最簡(jiǎn)單就是做色譜，只出一個(gè)峰就是了 |
10樓2010-11-24 08:51:04
changhailin
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11樓2010-11-24 11:04:28
changhailin
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12樓2010-11-24 11:15:40
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changhailin(金幣+1): 2010-11-24 16:56:06
| 就我目前做液質(zhì)的經(jīng)驗(yàn)看，TIC的峰形本來(lái)就很難像液相那樣對(duì)稱(chēng)的，因?yàn)橐合嗍菣z測(cè)光吸收，而TIC是離子流，離子流不會(huì)總是很穩(wěn)定很均勻的，自然峰形不好，而且一個(gè)和液相對(duì)應(yīng)的TIC峰里面本來(lái)就包含若干個(gè)小的小峰（就是一個(gè)小尖），每個(gè)小峰是一次掃描電壓的循環(huán)。只要你扣除背景后選擇TIC峰得到的質(zhì)譜圖是你所要的分子量就可以了 |
13樓2010-11-24 13:11:35
changhailin
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changhailin(金幣+1): 2010-11-24 17:27:18
| 如果你的液相只有一個(gè)峰的話(huà)，那基本是沒(méi)問(wèn)題的，因?yàn)橛形镔|(zhì)才有吸收，而對(duì)于質(zhì)譜，不管是溶劑還是儀器本身，都會(huì)帶來(lái)雜質(zhì)，所以不太好用它來(lái)判斷樣品是不是純，TIC的峰只代表總離子強(qiáng)度，有兩個(gè)峰只說(shuō)明它在兩個(gè)時(shí)間里檢測(cè)到更多的離子而已，不說(shuō)明是兩個(gè)物質(zhì)，除非這兩個(gè)峰對(duì)應(yīng)的液相也有兩個(gè)峰。TIC有尖峰是正常的，有時(shí)還會(huì)出現(xiàn)特別寬的峰的情況。液質(zhì)聯(lián)用的話(huà)，流動(dòng)相的選擇和比例確實(shí)對(duì)電離情況有影響 |
15樓2010-11-24 17:24:33
平平2010
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16樓2012-02-20 20:27:58
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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關(guān)于TIC峰，液相峰，二級(jí)質(zhì)譜峰的問(wèn)題16樓說(shuō)的好精彩啊，受教。 關(guān)于是否要梯度洗脫的問(wèn)題，我認(rèn)為最好是設(shè)置梯度洗脫。 首先，重疊在一起的峰雖然可以通過(guò)質(zhì)譜區(qū)分開(kāi)來(lái)，但濃度大的時(shí)候可能會(huì)產(chǎn)生離子抑制等可能。 其次，梯度洗脫可以排除雜質(zhì)的干擾，尤其在基體比較復(fù)雜的時(shí)候。 而且，梯度洗脫可以在程序中設(shè)置一定的柱子沖洗時(shí)間，延長(zhǎng)柱子壽命。 |
18樓2014-09-04 15:46:52
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