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2009103158

新蟲(chóng) (著名寫手)

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[交流] 【求助/交流】southern雜交求助！

本人正在做植物基因組的southern雜交以確定外源基因的拷貝數(shù)，用的是ROCHE的DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I。今天出了結(jié)果，十分郁悶，只有marker和陽(yáng)性對(duì)照顯色了，樣品沒(méi)有顏色。請(qǐng)看附圖，跪求高人相助！��！

上圖為提取的基因組DNA，以Hind111為marker

上圖為酶切基因組后取出的5ul樣跑膠看基因組是否被酶切完全，酶切體系為100ul

上圖為轉(zhuǎn)膜結(jié)束后檢驗(yàn)轉(zhuǎn)磨是否完全，殘留的片段是較大的片段

上圖為剛剛出來(lái)的結(jié)果，只有DNA marker和陽(yáng)性對(duì)照顯色，樣品沒(méi)有一個(gè)顯色的
忙碌了一星期，卻沒(méi)有得到結(jié)果，十分郁悶，請(qǐng)經(jīng)驗(yàn)人士給予幫助�。�！

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1樓 2010-11-28 15:42:42

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Sureking

新蟲(chóng) (初入文壇)

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引用回帖:

2樓: Originally posted by gyesang at 2010-11-28 17:07:14:
從你的酶切產(chǎn)物跑膠結(jié)果來(lái)看，你的基因組DNA降解了，因?yàn)槟愕臈l帶不是上面亮下邊暗，就是正好相反，高質(zhì)量的基因組DNA酶切出來(lái)跑膠后是均勻的一片
1

[img]http://pic.www.gaoyang168.com/201011/28/849017_170602.jpg[ ...

下面亮的應(yīng)該是沒(méi)有除去的rna吧

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3樓2011-11-19 20:59:36

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gyesang

榮譽(yù)版主 (著名寫手)

2009103158(金幣+1): 2011-02-11 20:13:00

從你的酶切產(chǎn)物跑膠結(jié)果來(lái)看，你的基因組DNA降解了，因?yàn)槟愕臈l帶不是上面亮下邊暗，就是正好相反，高質(zhì)量的基因組DNA酶切出來(lái)跑膠后是均勻的一片
1

好的酶切，電泳效果應(yīng)該是這樣，其中主要取決于DNA質(zhì)量的好壞

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2樓2010-11-28 17:07:14

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mascotte

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wanhscn(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-12-27 17:30:49

沒(méi)做過(guò)生物素標(biāo)記的探針，只做過(guò)同位素標(biāo)記的，同位素標(biāo)記探針的敏感度大大高于生物素；
探針長(zhǎng)度不夠的話雜交的效果也不好，我一般用長(zhǎng)度大于500bp的探針；
探針的類型不一樣的話（DNA or RNA），雜交的溫度也有區(qū)別；
膜的選擇應(yīng)該符合樣品和探針的類型；
最后，雜交液中的硫酸葡聚糖能夠提高信號(hào)強(qiáng)度，但是太多了背景會(huì)臟。

Good Luck！

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4樓2011-11-19 22:26:00

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馬馬和虎虎

新蟲(chóng) (小有名氣)

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請(qǐng)問(wèn)，Marker為什么可以顯色啊？

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6樓2011-12-27 18:44:33

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