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[交流]
【求助/交流】生物菜鳥求助基礎問題：如何判斷質粒是表達質粒還是克隆質粒？
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如題，最近發(fā)email向老外索要了一個質粒，pET29a-SmtA，查了一下這個質粒的來源，是在pET29a中插入了SmtA基因片段（可以表達ＭＴ蛋白）之后的質粒~ 可是質粒拿到手之后不知道如何使用啊~不知道這個質粒能否直接轉化到大腸桿菌中之后，能不能讓大腸桿菌合成出ＭＴ蛋白呢？ 我是學化學的，表達不專業(yè)，各位見諒，見諒～ 我的疑問有一下幾方面： 1，可以從質粒名稱知道這質粒是表達載體還是克隆載體嗎？表達載體就是轉化進宿主細胞之后就能表達出來該基因的嗎？ 2，如果單看質粒名字看不出來，如何鑒別之？ 多謝各位啦~ |
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
baby1_9253344(金幣+2):謝謝幫助~灰常詳盡啊~ 2010-12-03 08:43:55
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
baby1_9253344(金幣+2):謝謝幫助~灰常詳盡啊~ 2010-12-03 08:43:55
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看插入位點上游的啟動子是什么，有沒有操縱子結構等等 像這個是pET系列的衍生質粒，那肯定是表達質粒了，要轉化進表達用菌的感受態(tài)。如果要來的質粒很少的話，最好先轉克隆菌，多提一點質粒以備以后用。 因為pET29表達用的是T7啟動子，所以宿主菌要是T7噬菌體的溶源菌（最普通最常見的就是BL21(DE3)，感受態(tài)很容易買到）。調控元件是lac操縱子，所以要用IPTG誘導表達。 網上搜一下“pET表達手冊”，應該對你很有幫助。另外去Novagen網站上找pET29的圖譜信息，產品代碼TB076。 找不到的話站內我你的郵箱，我可以發(fā)給你。 |
2樓2010-12-02 21:34:33
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