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lwfangel銅蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】大腸桿菌菌液，如何再擴(kuò)增？ 已有5人參與
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用大腸桿菌做克隆，挑好白色單菌落之后，放到1mlAmp抗性的LB培養(yǎng)基中，搖菌，渾濁后做菌液PCR。對(duì)于有克隆產(chǎn)物的菌液，我怎樣才能得到更多的菌液呢？ 我想將有克隆產(chǎn)物的菌液吸取10ul，加到1mlAmp抗性的LB培養(yǎng)基中，搖菌，這樣做是否合理？我這樣做了之后，再做PCR去沒(méi)有產(chǎn)物條帶，不知道是什么原因？ 還有我做的菌液PCR在第二次，點(diǎn)樣跑膠時(shí)，去沒(méi)有條帶了，又是怎么回事？菌液PCR產(chǎn)物很不穩(wěn)定嗎？ |
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ben1147
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
rainwander(金幣+3):謝謝參與解答。菌液做PCR很容易產(chǎn)生假陽(yáng)性的。 2010-12-06 16:37:45
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
rainwander(金幣+3):謝謝參與解答。菌液做PCR很容易產(chǎn)生假陽(yáng)性的。 2010-12-06 16:37:45
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在無(wú)污染的情況下是可以用菌液繼續(xù)培養(yǎng)的 保險(xiǎn)起見(jiàn)還是先用菌液劃線或者稀釋之后涂板子挑單克隆再搖 菌落PCR一般都是假陽(yáng)性多，假陰性很少見(jiàn)到。是不是菌沉下去了，吸上清里沒(méi)多少菌所以P不出來(lái)？ PCR產(chǎn)物不應(yīng)該那么容易降解啊，再跑一次膠就沒(méi)有了？ |
2樓2010-12-06 14:14:10
lwfangel
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susizheng
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5樓2010-12-06 19:07:28
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6樓2010-12-06 22:45:44
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7樓2010-12-07 12:24:55
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9樓2010-12-08 12:53:22
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10樓2010-12-08 21:51:20
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