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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 如何把質粒轉入大腸桿菌中？
| 查看: 4184 | 回復: 13 | ||
zhang8826857鐵桿木蟲 (著名寫手)
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[求助]
如何把質粒轉入大腸桿菌中？
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| 我想把一個質粒轉入大腸桿菌中，是直接把大腸桿菌制成感受態(tài)細胞，然后把質粒和感受態(tài)細胞混合就可以了嗎？ |
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zhang8826857(金幣+7): ★有幫助 2012-02-21 09:24:55
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zhang8826857(金幣+7): ★有幫助 2012-02-21 09:24:55
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5樓2012-02-21 08:13:53
【答案】應助回帖
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zhang8826857(金幣+4): ★有幫助 2012-02-21 09:25:01
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恩 就是轉感受態(tài) 不過你感受態(tài)要做的好才行哈 如果感受態(tài)做的好100ng足以 1、將DNA加入50微升感受態(tài) 2、輕輕混勻 冰上放置30min 3、42°熱擊90S TIMER控制時間 4、加入1ml LB（超凈臺中操作） 37°搖1hour（不要搖太長時間，沒加抗生素） 5、3000轉離心 棄掉部分上清 剩下混勻涂板 37°培養(yǎng) |
6樓2012-02-21 09:20:12
imyting
至尊木蟲 (正式寫手)
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【答案】應助回帖
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zhang8826857(金幣+5): ★有幫助 2012-02-21 09:23:47
| 一種是自己購買BL21感受態(tài)細胞然后按照說明書進行轉化，另一種是自己培養(yǎng)BL21空菌，制成感受態(tài)細胞，再進行轉化。當然了，感受態(tài)細胞不止有BL21還有DH5a等，可根據實際情況選用。一般來說，表達的話還是BL21比較好，保存菌種用BL21。轉化的方法也不限于上述的Cacl2轉化法，還有電轉等，但是如果轉大腸桿菌的話，Cacl2轉化就足夠了。 |
2樓2012-02-20 17:54:48
3樓2012-02-20 19:42:30
lxj341401
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4樓2012-02-21 07:55:40
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7樓2012-02-21 09:51:55
8樓2012-02-21 10:12:19
9樓2012-03-29 15:48:37
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
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西瓜: 金幣+1, 鼓勵交流~有錢人啊~一般實驗，自己做的效率就夠高啦 2012-03-29 17:45:44
zhang8826857: 金幣+5, ★有幫助 2012-03-29 23:11:46
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zhang8826857: 金幣+5, ★有幫助 2012-03-29 23:11:46
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我覺得還是買比較好 比較放心 （剛好上星期才做過） 1.在感受態(tài)細胞剛解凍時加入載體 一般50：2就好 輕彈混勻，冰浴30min 2. 42°熱激45s 立即置于冰上2min （注意：不要搖動離心管） 3.向每個離心管中加入500ul LB培養(yǎng)基 混勻 37° 200r 培養(yǎng)1小時 4.普通離心機5000r 3min 沉淀即是 5.涂板是最好先倒掉一半上清再吹打均勻 然后涂 |
10樓2012-03-29 16:57:56
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