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【求助/交流】質(zhì)粒雙酶切，看圖！ 已有6人參與
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我是將我括的目的條帶連在T載體上，目的片段1380bp左右。T載體用的是寶生物的PMD-18載體有2692bp。我用的是Ecor1和Hand3 兩個(gè)酶切的。插入位點(diǎn)在這兩個(gè)酶切位點(diǎn)之間，兩個(gè)酶切位點(diǎn)相距六七十個(gè)bp，那么酶切后我的目的片段應(yīng)該是1400左右。M分別是300bp.500bp.800bp.1000bp.1500bp.3000bp.剩下的是4000bp-10000bp。比較亮的條帶是載體大概在3000bp下面，這樣看起來(lái)應(yīng)該沒(méi)錯(cuò)。但是在1500bp-1000bp下面的條帶特別弱，而且看起來(lái)也不到1400bp，不知道是不是我的目的條帶！ |
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lxj341401
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3樓2011-01-13 14:16:12
susizheng
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2樓2011-01-13 14:15:27
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4樓2011-01-13 14:22:07
yabxxh
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+2):good 2011-01-13 15:08:20
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+2):good 2011-01-13 15:08:20
| 目的條帶可能是正確的，說(shuō)可能是你的Marker跑歪了，說(shuō)正確是它確實(shí)在那個(gè)位置，但是亮度明顯不夠，是不是用的TAKARA的內(nèi)切酶，是的話，檢查一下這兩種酶在你用的那種Buffer里面的活性，是不是有一個(gè)活性特別低，或者兩個(gè)都很低？還有，酶切時(shí)間的問(wèn)題，也要考慮，你的質(zhì)粒濃度挺大，如果以上都沒(méi)有問(wèn)題，檢查酶是否足量，好運(yùn) |
5樓2011-01-13 15:07:00
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