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[交流]
【求助/交流】我做轉基因,如何把質(zhì)粒轉入農(nóng)桿菌中?
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自己有農(nóng)桿菌菌株,向外單位要了基因.還是簽了協(xié)議的. 別人給我們的基因應該是質(zhì)粒形態(tài)的還是整合在大腸桿菌里的?應該不會是簡單的雙鏈DNA吧,我想的話. 如果是整合在大腸桿菌里的,我該怎么把基因弄到農(nóng)桿菌中去? 如果是質(zhì)粒形態(tài)的,我該怎么把基因弄到農(nóng)桿菌里面去? 我需要技術路線,和注意事項.....謝謝....具體實驗操作可以網(wǎng)上搜索. 謝謝. |
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完了(金幣+1):謝謝參與
rainwander(金幣+2):很詳細啊，鼓勵積極參與交流~~~ 2011-01-14 14:18:35
完了(金幣+1):謝謝參與
rainwander(金幣+2):很詳細啊，鼓勵積極參與交流~~~ 2011-01-14 14:18:35
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一般應該都是質(zhì)粒吧，但是要看目的基因所在的質(zhì)粒是什么質(zhì)粒。如果是已經(jīng)構建好的雙元載體，那直接搖起來，提了質(zhì)粒，轉到農(nóng)桿菌里就行 要是只是一般的克隆用的大腸的質(zhì)粒，那要提了質(zhì)粒，把目的基因切下來或者P下來，然后連到雙元載體上，轉化大腸，挑克隆提質(zhì)粒驗證正確之后再轉到農(nóng)桿菌里 如果確實目的基因是在菌的染色體上，那就得先P，連克隆載體，再做亞克隆到雙元載體上轉化農(nóng)桿菌。 具體哪種情況問問那個外單位，肯定是知道的。 至于質(zhì)粒轉化農(nóng)桿菌，原理沒什么特別的，和轉大腸一樣，只不過制備感受態(tài)的溶液氯化鈣濃度不太一樣，要低一些。另外就是大腸是冰浴、42熱激，農(nóng)桿菌是液氮冷凍，37熱激。另外復蘇、培養(yǎng)時間什么的也要延長 |
2樓2011-01-14 13:39:45
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