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[交流]
【求助/交流】細(xì)菌基因組的單酶切問題 已有2人參與
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各位蟲友，我最近做了好幾次梭菌全基因組的單酶切，跑的電泳條帶覺得不對勁，大家?guī)臀铱纯窗�，多謝蟲友們啦！下邊我說說具體情況。首先按照CTAB法提取了細(xì)菌的基因組DNA，1%瓊脂糖電泳檢測，然后0.8%瓊脂糖切膠回收，試劑盒純化，1%瓊脂糖檢測純化產(chǎn)物。然后按照如下體系進(jìn)行酶切：第一次：BamH 1 1ul，10*buffer 3 5ul，DNA 20ul ，ddH2O 24ul，總體系50ul。第二次：BamH 1 0.5ul，10*buffer3 3ul，DNA 10ul ，ddH2O 16.5ul，總體系30ul。第三次：Pme 1 1ul，10*buffer4 3ul，DNA 8ul ，100*BSA 0.3ul，ddH2O 17.7ul，總體系30ul。都是37度酶切5小時(shí)或者以上。然后1%瓊脂糖電泳檢測，圖片在附件中。marker用的是2-log。圖片中的帶狀都是DNA的位置開始向下一抹彌散。這是怎么造成的呢？老師說圖片應(yīng)該是兩種情況，要么是整個(gè)泳道彌散狀，要么是幾條帶。我怎么跑出來是一點(diǎn)彌散呢？ |
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