版塊導(dǎo)航: 正在加載中...

應(yīng)《網(wǎng)絡(luò)安全法》要求，自2017年10月1日起，未進(jìn)行實(shí)名認(rèn)證將不得使用互聯(lián)網(wǎng)跟帖服務(wù)。為保障您的帳號(hào)能夠正常使用，請(qǐng)盡快對(duì)帳號(hào)進(jìn)行手機(jī)號(hào)驗(yàn)證，感謝您的理解與支持！

24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜

返回列表

belinda227

木蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 3708.4
帖子: 288
在線: 85.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 139739

[交流] 【求助/交流】畢赤酵母胞外表達(dá)上清無(wú)活性，但胞內(nèi)測(cè)得活性，WHY?

我的蛋白是個(gè)同源四聚體，每個(gè)亞基的分子量為57KD，是胞內(nèi)酶，AT含量很高，達(dá)到60%。選取亞基的片段與pPICZαA構(gòu)建了重組表達(dá)載體，分別電轉(zhuǎn)化SMD-1168和X-33宿主菌。前期經(jīng)過(guò)抗生素梯度抗性篩選，并經(jīng)PCR驗(yàn)證正確。根據(jù)操作手冊(cè)，用甲醇誘導(dǎo)其表達(dá)，在上清液中一直無(wú)法測(cè)到酶活。破碎菌體后發(fā)現(xiàn)在對(duì)照菌和重組菌中均能測(cè)到活力，且X-33重組菌的活力是其對(duì)照菌的2-3倍。
這是否說(shuō)明該酶在胞內(nèi)表達(dá)了？因?yàn)槲醇訕?biāo)簽，在SDS-PAGE上無(wú)法判斷那條帶是表達(dá)了的重組蛋白。但無(wú)法分泌到胞外的原因是因?yàn)樾盘?hào)肽還是分子量太大？或者其他原因？請(qǐng)各位畢赤酵母表達(dá)高手幫我指點(diǎn)迷津，謝謝了！

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇” 已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有182人回復(fù)
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)

» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

求助有關(guān)表面活性劑已經(jīng)有17人回復(fù)
請(qǐng)教非水溶性表面活性劑增溶問(wèn)題已經(jīng)有24人回復(fù)
活性炭載體催化劑XRD 遇到的一些問(wèn)題已經(jīng)有16人回復(fù)
光催化劑對(duì)羅丹明B有很好的降解活性，但是對(duì)甲基橙降解活性很不好，為什么已經(jīng)有13人回復(fù)
畢赤酵母的篩選已經(jīng)有3人回復(fù)
畢赤酵母基因重組時(shí)遇到困難了已經(jīng)有9人回復(fù)
北京有外包的檢測(cè)藥物活性的公司嗎？已經(jīng)有6人回復(fù)
三次采油用表面活性劑，采油后去哪里了，有后處理嗎已經(jīng)有5人回復(fù)
殼聚糖復(fù)合活性炭微球怎么干燥？已經(jīng)有13人回復(fù)
下列表面活性劑的臨界膠束濃度，克拉夫特點(diǎn)，濁點(diǎn) 已經(jīng)有7人回復(fù)
怎樣鑒定畢赤（GS115）重組菌是胞內(nèi)還是胞外表達(dá) 已經(jīng)有5人回復(fù)
畢赤酵母表達(dá)出蛋白但沒(méi)有活性已經(jīng)有18人回復(fù)
畢赤酵母表達(dá)的蛋白無(wú)活性已經(jīng)有8人回復(fù)
大家見(jiàn)到過(guò)畢赤酵母表達(dá)出的外源蛋白分子量比實(shí)際分子量小嗎，而且還有活性？已經(jīng)有20人回復(fù)
【求助/交流】畢赤酵母表達(dá)胞外蛋白，sds電泳后看不到條帶已經(jīng)有7人回復(fù)
【求助/交流】請(qǐng)問(wèn)畢赤酵母胞外胞外表達(dá)有酶活不蛋白，正常嗎？已經(jīng)有8人回復(fù)

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼

1樓 2011-01-18 16:41:23

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

lxj341401

至尊木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

MolEPI: 58
應(yīng)助: 388 (碩士)
貴賓: 0.238
金幣: 17138.7
帖子: 2251
在線: 712.4小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 111074

★ ★
dhd997(金幣+2): 牛人啊 2011-01-19 09:46:19
belinda227(金幣+1): 2011-01-19 19:56:16

酵母表達(dá)確實(shí)存在有信號(hào)肽但是不能分泌表達(dá)的現(xiàn)象。

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

2樓2011-01-18 23:02:46

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

fungixx

至尊木蟲(chóng) (文壇精英)

應(yīng)助: 37 (小學(xué)生)
貴賓: 3.458
金幣: 19627.6
帖子: 13324
在線: 2030.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 860534

belinda227(金幣+2): 2011-01-21 17:42:16

為啥對(duì)照菌株也能檢測(cè)活性捏什么基因難道畢赤酵母本身也有
在畢赤酵母中想表達(dá)不出胞外蛋白很正常我以同學(xué)也是想做胞外表達(dá) 但是做了好長(zhǎng)時(shí)間都分泌不出來(lái) 最后只能胞內(nèi)表達(dá)了。。。。不過(guò)胞內(nèi)表達(dá)沒(méi)多少意思。。。麻煩啊

贊一下

回復(fù)此樓

3樓2011-01-21 00:25:34

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

belinda227

木蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 3708.4
帖子: 288
在線: 85.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 139739

引用回帖:

Originally posted by fungixx at 2011-01-21 00:25:34:
為啥對(duì)照菌株也能檢測(cè)活性捏什么基因難道畢赤酵母本身也有
在畢赤酵母中想表達(dá)不出胞外蛋白很正常我以同學(xué)也是想做胞外表達(dá) 但是做了好長(zhǎng)時(shí)間都分泌不出來(lái) 最后只能胞內(nèi)表達(dá)了。。。。不過(guò)胞內(nèi)表達(dá)沒(méi)多少 ...

對(duì) 畢赤酵母本身也有的蛋白

贊一下

回復(fù)此樓

4樓2011-01-21 17:41:55

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

wyfdgg

新蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: -39.6
帖子: 36
在線: 20.4小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1667881

★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

您好，我想咨詢一下您是怎么進(jìn)行菌體破碎的。我遇到了您這邊同樣的問(wèn)題，想看一下是不是蛋白在胞內(nèi)表達(dá)了

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

5樓2015-11-18 10:33:53

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn) 我要訂閱樓主 belinda227 的主題更新

返回列表

普通表情龍兔虎貓高級(jí)回復(fù) (可上傳附件)

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]		作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 268求調(diào)劑 +8	一定有學(xué)上- 2026-03-14	9/450	2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] 312求調(diào)劑 +4	陌宸希 2026-03-16	5/250	2026-03-17 17:09 by ruiyingmiao
[考研] 085600材料與化工求調(diào)劑 +5	緒幸與子 2026-03-17	5/250	2026-03-17 16:40 by laoshidan
[考研] 085600材料與化工 +4	安全上岸！ 2026-03-16	4/200	2026-03-17 14:02 by 勇敢太監(jiān)王公公
[考研] 0854可跨調(diào)劑，一作一項(xiàng)核心論文五項(xiàng)專(zhuān)利，省、國(guó)級(jí)證書(shū)40+數(shù)一英一287 +3	小李0854 2026-03-16	3/150	2026-03-17 13:40 by 熱情沙漠
[考研] 326求調(diào)劑 +4	諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)覬?/a> 2026-03-15	7/350	2026-03-16 17:11 by 諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)覬?/a>
[考研] 0703一志愿211 285分求調(diào)劑 +5	ly3471z 2026-03-13	5/250	2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 070300化學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +6	太想進(jìn)步了0608 2026-03-16	6/300	2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 290分有科研經(jīng)歷，論文在投 +7	膩膩gk 2026-03-14	7/350	2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[教師之家] 焦慮 +7	水冰月月野兔 2026-03-13	9/450	2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[考研] 求老師收留調(diào)劑 +4	jiang姜66 2026-03-14	5/250	2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 22408總分284求調(diào)劑 +3	InAspic 2026-03-13	3/150	2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 289求調(diào)劑 +4	這么名字咋樣 2026-03-14	6/300	2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 332求調(diào)劑 +3	zjy101327 2026-03-11	6/300	2026-03-13 22:48 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中科院，化學(xué)方向，295求調(diào)劑 +4	一氧二氮 2026-03-11	4/200	2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 333求調(diào)劑 +3	球球古力 2026-03-11	3/150	2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 一志愿211化學(xué)學(xué)碩310分求調(diào)劑 +8	努力奮斗112 2026-03-12	9/450	2026-03-13 15:41 by JourneyLucky
[考研] 314求調(diào)劑 +7	無(wú)懈可擊的巨人 2026-03-12	7/350	2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 283求調(diào)劑，材料、化工皆可 +8	蘇打水7777 2026-03-11	10/500	2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考研] 大連大學(xué)化學(xué)專(zhuān)業(yè)研究生調(diào)劑 +3	琪久. 2026-03-10	8/400	2026-03-11 10:02 by 琪久.