sanmaoecho

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[交流] 【求助/交流】細(xì)胞系轉(zhuǎn)染的時(shí)間探討

想了解一下大家做細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)的幾個(gè)小細(xì)節(jié)：1、對于293、293T這種貼壁不是很緊的細(xì)胞系，大家都是分了細(xì)胞之后多長時(shí)間做轉(zhuǎn)染呢？或者細(xì)胞長到那種密度做轉(zhuǎn)染呢？2、轉(zhuǎn)染之后大家都是多久收細(xì)胞呢？或者是多大密度收細(xì)胞呢？3、轉(zhuǎn)染之后的細(xì)胞如果很長時(shí)間不收，例如48h~72h不收細(xì)胞，轉(zhuǎn)進(jìn)去的外源基因還有沒有表達(dá)呢？表達(dá)量怎么樣呢？希望和有經(jīng)驗(yàn)的大俠探討一下啊

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1樓 2011-01-21 14:19:14

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feng__

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sanmaoecho(金幣+1): 2011-01-21 17:31:01

1, 鋪板24-48轉(zhuǎn)染主要看你鋪的密度想24H的話可以1W每孔

2，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染24H夠了，不過我們做的時(shí)候不收細(xì)胞，直接做flipr

3, 48H還沒神馬問題的，72就不知道了

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2樓2011-01-21 16:05:35

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引用回帖:

Originally posted by feng__ at 2011-01-21 16:05:35:
1, 鋪板24-48轉(zhuǎn)染主要看你鋪的密度想24H的話可以1W每孔

2，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染24H夠了，不過我們做的時(shí)候不收細(xì)胞，直接做flipr

3, 48H還沒神馬問題的，72就不知道了

謝謝！如果我想在鋪板之后16h或者更短的時(shí)間內(nèi)做轉(zhuǎn)然可以嗎？用的是維格拉斯的VigoFect脂質(zhì)體

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3樓2011-01-21 17:33:44

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feng__

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sanmaoecho(金幣+1): 謝謝！ 2011-01-22 09:00:17

引用回帖:

Originally posted by sanmaoecho at 2011-01-21 17:33:44:

謝謝！如果我想在鋪板之后16h或者更短的時(shí)間內(nèi)做轉(zhuǎn)然可以嗎？用的是維格拉斯的VigoFect脂質(zhì)體

細(xì)胞鋪的密一點(diǎn)就行了

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4樓2011-01-22 00:12:16

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zhp1984816

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sanmaoecho(金幣+1): 謝謝！ 2011-01-22 09:00:30
silicare(金幣+2): 謝謝分享 2011-01-22 11:09:22

這個(gè)轉(zhuǎn)染的時(shí)間根據(jù)細(xì)胞的密度吧，我一般5000細(xì)胞每孔種入24孔板。待細(xì)胞長到60——70%的時(shí)候開始轉(zhuǎn)染，這個(gè)看細(xì)胞系，有的細(xì)胞長的快，種完后需要的時(shí)間短些。轉(zhuǎn)染完后我們做luciferase，都是24小時(shí)后收取細(xì)胞。

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5樓2011-01-22 00:37:18

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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

我也有這樣的疑問。。
我轉(zhuǎn)293T細(xì)胞，以前分后24H轉(zhuǎn)，用lipo2000，效果好。。6h換液，48h-72h收樣。。。。
效果不錯(cuò)。。
但這次分了后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞不夠，準(zhǔn)備嘗試下樓上說的48h內(nèi)轉(zhuǎn)。。。希望有好的結(jié)果。。。。

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6樓2013-03-07 19:23:09

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peng5053

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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

對于細(xì)胞轉(zhuǎn)染，一般在細(xì)胞中期轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染效率會(huì)相對高一些。這個(gè)時(shí)候的細(xì)胞狀態(tài)是最好的。對于HEK293T來說，一般轉(zhuǎn)染的最佳時(shí)間是在傳代后24hr以內(nèi)。轉(zhuǎn)染后48hr，外源基因肯定是有表達(dá)的。至于72hr，應(yīng)該也還是有表達(dá)的，可能表達(dá)量會(huì)很低，主要是這個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞大部分都衰老了。建議293T收集細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染后36-48hr收集。

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7樓2013-03-08 11:33:17

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louisa俊

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293T的話，控制好細(xì)胞數(shù)，第二天就可以轉(zhuǎn)了。。。

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8樓2013-11-19 14:51:49

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