sanmaoecho

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 496.5
帖子: 59
在線(xiàn): 20.4小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1166207

[交流] 【求助/交流】細(xì)胞系轉(zhuǎn)染的時(shí)間探討

想了解一下大家做細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)的幾個(gè)小細(xì)節(jié)：1、對(duì)于293、293T這種貼壁不是很緊的細(xì)胞系，大家都是分了細(xì)胞之后多長(zhǎng)時(shí)間做轉(zhuǎn)染呢？或者細(xì)胞長(zhǎng)到那種密度做轉(zhuǎn)染呢？2、轉(zhuǎn)染之后大家都是多久收細(xì)胞呢？或者是多大密度收細(xì)胞呢？3、轉(zhuǎn)染之后的細(xì)胞如果很長(zhǎng)時(shí)間不收，例如48h~72h不收細(xì)胞，轉(zhuǎn)進(jìn)去的外源基因還有沒(méi)有表達(dá)呢？表達(dá)量怎么樣呢？希望和有經(jīng)驗(yàn)的大俠探討一下啊

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇” 已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有118人回復(fù)
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線(xiàn) 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

研究細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，建立細(xì)胞系，是否一定要敲出細(xì)胞內(nèi)源性蛋白分子？已經(jīng)有8人回復(fù)
基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染如何做到無(wú)菌已經(jīng)有4人回復(fù)
【求助/交流】G418篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染已經(jīng)有12人回復(fù)
【求助/交流】轉(zhuǎn)染后的Hela S3行免疫熒光后在顯微鏡下觀察，無(wú)圖像，失敗原因探討。已經(jīng)有7人回復(fù)
【推薦】973 三維培養(yǎng)干細(xì)胞自我更新與定向分化的調(diào)控網(wǎng)絡(luò) 已經(jīng)有9人回復(fù)
zeocin篩選穩(wěn)定細(xì)胞系問(wèn)題已經(jīng)有3人回復(fù)

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼

1樓 2011-01-21 14:19:14

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

feng__

金蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 882.6
帖子: 1534
在線(xiàn): 312.5小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1061078

sanmaoecho(金幣+1): 2011-01-21 17:31:01

1, 鋪板24-48轉(zhuǎn)染主要看你鋪的密度想24H的話(huà)可以1W每孔

2，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染24H夠了，不過(guò)我們做的時(shí)候不收細(xì)胞，直接做flipr

3, 48H還沒(méi)神馬問(wèn)題的，72就不知道了

贊一下

回復(fù)此樓

2樓2011-01-21 16:05:35

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

sanmaoecho

金蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 496.5
帖子: 59
在線(xiàn): 20.4小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1166207

引用回帖:

Originally posted by feng__ at 2011-01-21 16:05:35:
1, 鋪板24-48轉(zhuǎn)染主要看你鋪的密度想24H的話(huà)可以1W每孔

2，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染24H夠了，不過(guò)我們做的時(shí)候不收細(xì)胞，直接做flipr

3, 48H還沒(méi)神馬問(wèn)題的，72就不知道了

謝謝！如果我想在鋪板之后16h或者更短的時(shí)間內(nèi)做轉(zhuǎn)然可以嗎？用的是維格拉斯的VigoFect脂質(zhì)體

贊一下

回復(fù)此樓

3樓2011-01-21 17:33:44

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

feng__

金蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 882.6
帖子: 1534
在線(xiàn): 312.5小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1061078

sanmaoecho(金幣+1): 謝謝！ 2011-01-22 09:00:17

引用回帖:

Originally posted by sanmaoecho at 2011-01-21 17:33:44:

謝謝！如果我想在鋪板之后16h或者更短的時(shí)間內(nèi)做轉(zhuǎn)然可以嗎？用的是維格拉斯的VigoFect脂質(zhì)體

細(xì)胞鋪的密一點(diǎn)就行了

贊一下

回復(fù)此樓

4樓2011-01-22 00:12:16

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

zhp1984816

銅蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 289
帖子: 44
在線(xiàn): 16.8小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1190315

★ ★
sanmaoecho(金幣+1): 謝謝！ 2011-01-22 09:00:30
silicare(金幣+2): 謝謝分享 2011-01-22 11:09:22

這個(gè)轉(zhuǎn)染的時(shí)間根據(jù)細(xì)胞的密度吧，我一般5000細(xì)胞每孔種入24孔板。待細(xì)胞長(zhǎng)到60——70%的時(shí)候開(kāi)始轉(zhuǎn)染，這個(gè)看細(xì)胞系，有的細(xì)胞長(zhǎng)的快，種完后需要的時(shí)間短些。轉(zhuǎn)染完后我們做luciferase，都是24小時(shí)后收取細(xì)胞。

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

5樓2011-01-22 00:37:18

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

26264716

鐵蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 587.5
帖子: 93
在線(xiàn): 61.8小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2041095

★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

我也有這樣的疑問(wèn)。。
我轉(zhuǎn)293T細(xì)胞，以前分后24H轉(zhuǎn)，用lipo2000，效果好。。6h換液，48h-72h收樣。。。。
效果不錯(cuò)。。
但這次分了后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞不夠，準(zhǔn)備嘗試下樓上說(shuō)的48h內(nèi)轉(zhuǎn)。。。希望有好的結(jié)果。。。。

贊一下

回復(fù)此樓

6樓2013-03-07 19:23:09

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

peng5053

銀蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 3 (幼兒園)
金幣: 303
帖子: 326
在線(xiàn): 90.5小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 589471

★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

對(duì)于細(xì)胞轉(zhuǎn)染，一般在細(xì)胞中期轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染效率會(huì)相對(duì)高一些。這個(gè)時(shí)候的細(xì)胞狀態(tài)是最好的。對(duì)于HEK293T來(lái)說(shuō)，一般轉(zhuǎn)染的最佳時(shí)間是在傳代后24hr以?xún)?nèi)。轉(zhuǎn)染后48hr，外源基因肯定是有表達(dá)的。至于72hr，應(yīng)該也還是有表達(dá)的，可能表達(dá)量會(huì)很低，主要是這個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞大部分都衰老了。建議293T收集細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染后36-48hr收集。

贊一下

回復(fù)此樓

7樓2013-03-08 11:33:17

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

louisa俊

銀蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 6 (幼兒園)
金幣: 111.2
帖子: 211
在線(xiàn): 45.9小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1343485

★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

293T的話(huà)，控制好細(xì)胞數(shù)，第二天就可以轉(zhuǎn)了。。。

贊一下

回復(fù)此樓

8樓2013-11-19 14:51:49

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 303求調(diào)劑 +3	睿08 2026-03-17	5/250	2026-03-17 22:01 by 睿08
[考研] 268求調(diào)劑 +8	一定有學(xué)上- 2026-03-14	9/450	2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] 308求調(diào)劑 +4	是Lupa啊 2026-03-16	4/200	2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 【0856】化學(xué)工程（085602）313 分，本科學(xué)科評(píng)估A類(lèi)院�；瘜W(xué)工程與工藝，誠(chéng)求調(diào)劑 +7	小劉快快上岸 2026-03-11	8/400	2026-03-17 16:57 by ruiyingmiao
[考研] 286求調(diào)劑 +3	lemonzzn 2026-03-16	5/250	2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[考研] 318求調(diào)劑 +3	Yanyali 2026-03-15	3/150	2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 304求調(diào)劑 +3	曼殊2266 2026-03-14	3/150	2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 277材料科學(xué)與工程080500求調(diào)劑 +3	自由煎餅果子 2026-03-16	3/150	2026-03-16 14:10 by 運(yùn)氣yunqi
[考研] 326求調(diào)劑 +3	mlpqaz03 2026-03-15	3/150	2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 080500，材料學(xué)碩302分求調(diào)劑學(xué)校 +4	初識(shí)可樂(lè) 2026-03-14	5/250	2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 材料與化工 323 英一+數(shù)二+物化，一志愿：哈工大本人本科雙一流 +4	自由的_飛翔 2026-03-13	5/250	2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 一志愿哈工大材料324分求調(diào)劑 +5	閆旭東 2026-03-14	5/250	2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 學(xué)碩285求調(diào)劑 +13	Wisjxn 2026-03-12	46/2300	2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[基金申請(qǐng)] 有必要更換申報(bào)口嗎 20+3	fannyamoy 2026-03-11	3/150	2026-03-14 00:52 by zhanghaozhu
[考研] （081700）化學(xué)工程與技術(shù)-298分求調(diào)劑 +12	11啦啦啦 2026-03-11	35/1750	2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 315求調(diào)劑 +9	小羊小羊_ 2026-03-11	10/500	2026-03-13 21:13 by SXNU李老師
[碩博家園] 085600 260分求調(diào)劑 +3	天空還下雨么 2026-03-13	5/250	2026-03-13 18:46 by 天空還下雨么
[考研] 工科278分求調(diào)劑 +5	周慢熱啊 2026-03-12	7/350	2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 328化工專(zhuān)碩求調(diào)劑 +4	。，。，。，。i 2026-03-12	4/200	2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[考研] 一志愿山大07化學(xué) 332分四六級(jí)已過(guò) 本科山東雙非求調(diào)劑！ +3	不想理你 2026-03-12	3/150	2026-03-13 14:18 by JourneyLucky