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baby1_9253344金蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】做酵母的蟲(chóng)蟲(chóng)們幫忙看一下~
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需要按照文獻(xiàn)培養(yǎng)帶有某種質(zhì)粒的釀酒酵母（S. cerevisiae），讓它表達(dá)出特定蛋白，這時(shí)候用的培養(yǎng)基和普通YPD不一樣，如原文描述： "...studies were cultured in URA+ selective dextrose (SD) medium (0.7% [w/v] Difco yeast nitrogen base, 2% [w/v] glucose, 0.005% [w/v] adenine hemisulfate, and each of L-histidine, L-tryptophan and L-leucine at concentration of 0.003% [w/v])." 查了《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》里面的SD培養(yǎng)基中的氮源好像是無(wú)氨基酸的，文獻(xiàn)里的酵母氮源并沒(méi)有特指without amino acid，那應(yīng)該是什么樣的呢，還有，搞不清楚什么是“URA+ selective dextrose”，URA+的意思。 還請(qǐng)各位做酵母的童鞋幫忙翻譯一下...弄清楚了好訂購(gòu)培養(yǎng)基。。。。  |
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susizheng
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
rainwander(金幣+1): 鼓勵(lì)積極參與交流~~~ 2011-02-19 22:05:23
baby1_9253344(金幣+1): 謝謝詳細(xì)解答！ 2011-02-21 09:19:06
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baby1_9253344(金幣+1): 謝謝詳細(xì)解答！ 2011-02-21 09:19:06
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SD培養(yǎng)基中的氮源是一種無(wú)氨基酸的氮源，試劑公司有的賣(mài)，YNB，買(mǎi)的時(shí)候記得弄清楚是否已經(jīng)添加了硫酸銨。 URA+，指該實(shí)驗(yàn)中用到的釀酒酵母菌株是URA缺陷型，用SD篩選培養(yǎng)基時(shí)，需要添加URA. |
2樓2011-02-19 21:56:18
gongeleven
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3樓2011-02-20 12:30:51
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4樓2011-02-20 16:13:55
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baby1_9253344(金幣+1): 多謝~可惜剛才上Invitrogen官網(wǎng)，打不開(kāi)，不曉得怎么下載相關(guān)資料了。。。 2011-02-21 09:20:08
dhd997(金幣+2): 熱心鼓勵(lì) 2011-02-21 09:26:32
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baby1_9253344(金幣+1): 多謝~可惜剛才上Invitrogen官網(wǎng)，打不開(kāi)，不曉得怎么下載相關(guān)資料了。。。 2011-02-21 09:20:08
dhd997(金幣+2): 熱心鼓勵(lì) 2011-02-21 09:26:32
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按照你給的參考文獻(xiàn)，你的菌株可能是ura-，his-，try-，leu-的菌株，你的載體可能有URA選擇標(biāo)記，那么培養(yǎng)基中的YNB肯定是無(wú)氨基酸的，但是為啥沒(méi)寫(xiě)加入ura的量呢？釀酒酵母相關(guān)知識(shí)你可以下載Invitrogen的釀酒酵母表達(dá)載體相關(guān)資料 |
5樓2011-02-20 20:09:29
baby1_9253344
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susizheng
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silicare(金幣+1): 謝謝參與 2011-02-21 12:25:34
baby1_9253344(金幣+1): 呵呵發(fā)現(xiàn)我這幾天發(fā)問(wèn)都是你給回復(fù)的啊，在此謝過(guò)了~ 2011-02-21 15:22:37
silicare(金幣+1): 謝謝參與 2011-02-21 12:25:34
baby1_9253344(金幣+1): 呵呵發(fā)現(xiàn)我這幾天發(fā)問(wèn)都是你給回復(fù)的啊，在此謝過(guò)了~ 2011-02-21 15:22:37
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YNB這種試劑里面的硫酸銨有的是需要自己添加的，有的是已經(jīng)添加好的，問(wèn)問(wèn)試劑公司就可以了，不過(guò)一般都是添加好的，不用擔(dān)心。 今天看了下5樓的回復(fù)，感覺(jué)他說(shuō)的有道理。URA+應(yīng)該不是指要在SD添加URA，應(yīng)該是指釀酒酵母本身是URA缺陷型的，而載體上有URA篩選標(biāo)記，正好形成互補(bǔ)。 |
7樓2011-02-21 10:41:56
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8樓2011-02-21 15:47:19
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S. cerevisiae W303(MATa leu 2-3/112 ura 3-1 trp 1-1 his 3-11/15 ade 2-1 can 1-100 mal 10 GAL SUC2)括號(hào)里面指該菌株的缺失的基因啊，比如缺失leu，ura， trp......，用SD培養(yǎng)基是只有添加了這些氨基酸或者嘧啶的時(shí)候，釀酒酵母才能生長(zhǎng)，轉(zhuǎn)入釀酒酵母的質(zhì)粒后，由于質(zhì)粒上有URA基因，因此，轉(zhuǎn)質(zhì)粒后，釀酒酵母在未添加URA的SD培養(yǎng)基上可以生長(zhǎng)，從而達(dá)到篩選的目的。 沒(méi)什么難懂的啊，看看釀酒酵母drop-out培養(yǎng)基相關(guān)知識(shí)就OK了。 http://www.hopebiol.com/asphtml/refere104.htm [ Last edited by susizheng on 2011-2-21 at 16:27 ] |
9樓2011-02-21 16:25:40
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10樓2011-02-21 16:32:22
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