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[交流] 【求助/交流】做酵母的蟲蟲們幫忙看一下~

需要按照文獻(xiàn)培養(yǎng)帶有某種質(zhì)粒的釀酒酵母（S. cerevisiae），讓它表達(dá)出特定蛋白，這時候用的培養(yǎng)基和普通YPD不一樣，如原文描述：

"...studies were cultured in URA+ selective dextrose (SD)
medium (0.7% [w/v] Difco yeast nitrogen base, 2% [w/v] glucose, 0.005%
[w/v] adenine hemisulfate, and each of L-histidine, L-tryptophan and
L-leucine at concentration of 0.003% [w/v])."

查了《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》里面的SD培養(yǎng)基中的氮源好像是無氨基酸的，文獻(xiàn)里的酵母氮源并沒有特指without amino acid，那應(yīng)該是什么樣的呢，還有，搞不清楚什么是“URA+ selective dextrose”，URA+的意思。

還請各位做酵母的童鞋幫忙翻譯一下...弄清楚了好訂購培養(yǎng)基。。。。

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1樓 2011-02-19 20:27:10

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susizheng

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rainwander(金幣+1): 鼓勵積極參與交流~~~ 2011-02-19 22:05:23
baby1_9253344(金幣+1): 謝謝詳細(xì)解答！ 2011-02-21 09:19:06

SD培養(yǎng)基中的氮源是一種無氨基酸的氮源，試劑公司有的賣，YNB，買的時候記得弄清楚是否已經(jīng)添加了硫酸銨。
URA+，指該實(shí)驗(yàn)中用到的釀酒酵母菌株是URA缺陷型，用SD篩選培養(yǎng)基時，需要添加URA.

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2樓2011-02-19 21:56:18

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baby1_9253344(金幣+1): 3Q 2011-02-21 09:19:23

要知道酵母里的是什么質(zhì)粒

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3樓2011-02-20 12:30:51

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baby1_9253344

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Originally posted by gongeleven at 2011-02-20 04:30:51:
要知道酵母里的是什么質(zhì)粒

質(zhì)粒p416GPD,centromeric plasmid

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4樓2011-02-20 16:13:55

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lwenshan

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baby1_9253344(金幣+1): 多謝~可惜剛才上Invitrogen官網(wǎng)，打不開，不曉得怎么下載相關(guān)資料了。。。 2011-02-21 09:20:08
dhd997(金幣+2): 熱心鼓勵 2011-02-21 09:26:32

按照你給的參考文獻(xiàn)，你的菌株可能是ura-，his-，try-，leu-的菌株，你的載體可能有URA選擇標(biāo)記，那么培養(yǎng)基中的YNB肯定是無氨基酸的，但是為啥沒寫加入ura的量呢？釀酒酵母相關(guān)知識你可以下載Invitrogen的釀酒酵母表達(dá)載體相關(guān)資料

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5樓2011-02-20 20:09:29

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Originally posted by susizheng at 2011-02-19 13:56:18:
SD培養(yǎng)基中的氮源是一種無氨基酸的氮源，試劑公司有的賣，YNB，買的時候記得弄清楚是否已經(jīng)添加了硫酸銨。
URA+，指該實(shí)驗(yàn)中用到的釀酒酵母菌株是URA缺陷型，用SD篩選培養(yǎng)基時，需要添加URA.

謝謝你的詳細(xì)解答~那如何判斷是否添加硫酸銨，或者說，什么培養(yǎng)基需要添加硫酸銨，什么時候不需要呢？

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6樓2011-02-21 09:15:37

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susizheng

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silicare(金幣+1): 謝謝參與 2011-02-21 12:25:34
baby1_9253344(金幣+1): 呵呵發(fā)現(xiàn)我這幾天發(fā)問都是你給回復(fù)的啊，在此謝過了~ 2011-02-21 15:22:37

引用回帖:

Originally posted by baby1_9253344 at 2011-02-21 01:15:37:
謝謝你的詳細(xì)解答~那如何判斷是否添加硫酸銨，或者說，什么培養(yǎng)基需要添加硫酸銨，什么時候不需要呢？

YNB這種試劑里面的硫酸銨有的是需要自己添加的，有的是已經(jīng)添加好的，問問試劑公司就可以了，不過一般都是添加好的，不用擔(dān)心。
今天看了下5樓的回復(fù)，感覺他說的有道理。URA+應(yīng)該不是指要在SD添加URA，應(yīng)該是指釀酒酵母本身是URA缺陷型的，而載體上有URA篩選標(biāo)記，正好形成互補(bǔ)。

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7樓2011-02-21 10:41:56

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Originally posted by susizheng at 2011-02-21 02:41:56:
YNB這種試劑里面的硫酸銨有的是需要自己添加的，有的是已經(jīng)添加好的，問問試劑公司就可以了，不過一般都是添加好的，不用擔(dān)心。
今天看了下5樓的回復(fù)，感覺他說的有道理。URA+應(yīng)該不是指要在SD添加URA，應(yīng)該是 ...

哎....我徹底暈了，大腸桿菌的克隆什么的還沒搞明白呢，又得學(xué)習(xí)酵母的...
此釀酒酵母為S. cerevisiae W303(MATa leu 2-3/112 ura 3-1 trp 1-1 his 3-11/15 ade 2-1 can 1-100 mal 10 GAL SUC2)我實(shí)在看不懂，跟密碼一樣...
質(zhì)粒p416GPD的相關(guān)性狀，在文獻(xiàn)中查到，叫URA3作為它的marker gene。不懂什么意思額。。。

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8樓2011-02-21 15:47:19

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susizheng

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Originally posted by baby1_9253344 at 2011-02-21 07:47:19:
哎....我徹底暈了，大腸桿菌的克隆什么的還沒搞明白呢，又得學(xué)習(xí)酵母的...
此釀酒酵母為S. cerevisiae W303(MATa leu 2-3/112 ura 3-1 trp 1-1 his 3-11/15 ade 2-1 can 1-100 mal 10 GAL SUC2)我實(shí)在看 ...

S. cerevisiae W303(MATa leu 2-3/112 ura 3-1 trp 1-1 his 3-11/15 ade 2-1 can 1-100 mal 10 GAL SUC2)括號里面指該菌株的缺失的基因啊，比如缺失leu，ura， trp......，用SD培養(yǎng)基是只有添加了這些氨基酸或者嘧啶的時候，釀酒酵母才能生長，轉(zhuǎn)入釀酒酵母的質(zhì)粒后，由于質(zhì)粒上有URA基因，因此，轉(zhuǎn)質(zhì)粒后，釀酒酵母在未添加URA的SD培養(yǎng)基上可以生長，從而達(dá)到篩選的目的。
沒什么難懂的啊，看看釀酒酵母drop-out培養(yǎng)基相關(guān)知識就OK了。
http://www.hopebiol.com/asphtml/refere104.htm

[ Last edited by susizheng on 2011-2-21 at 16:27 ]

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9樓2011-02-21 16:25:40

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Originally posted by susizheng at 2011-02-21 08:25:40:
S. cerevisiae W303(MATa leu 2-3/112 ura 3-1 trp 1-1 his 3-11/15 ade 2-1 can 1-100 mal 10 GAL SUC2)括號里面指該菌株的缺失的基因啊，比如缺失leu，ura， trp......，用SD培養(yǎng)基是只有添加了這些氨基酸或 ...

oh, I see...經(jīng)你這么一翻譯俺就明白了，3Q...

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10樓2011-02-21 16:32:22

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