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王有朝

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[交流] 【求助/交流】關(guān)于基因擴(kuò)增的問(wèn)題

NCBI上的序列是cDNA序列還是全基因組序列？如果我想擴(kuò)增魚(yú)的Beta-actin基因，按NCBI上序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物，那么用作原料的魚(yú)類(lèi)肌肉提取DNA后是否還得反轉(zhuǎn)錄才能進(jìn)行擴(kuò)增？
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1樓 2011-03-01 13:41:11

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glidingwater

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DNA不需反轉(zhuǎn)錄，如果提取的是RNA才需反轉(zhuǎn)錄后擴(kuò)增

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2樓2011-03-02 20:54:56

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nininini

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直接擴(kuò)增就好了~~

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3樓2011-03-02 21:00:34

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zy020202

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★ ★
rainwander(金幣+2): 鼓勵(lì)積極參與~~~ 2011-03-02 21:35:54

數(shù)據(jù)庫(kù)中的DNA序列有的是全序列，有的僅有編碼區(qū)，你要看好了。
RNA才需要反轉(zhuǎn)錄成cDNA,若需要全基因組包括非編碼區(qū)，最好是用反求基因組學(xué)，通過(guò)提取RNA，RT-PCR得到DNA。

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4樓2011-03-02 21:03:48

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王有朝

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再次請(qǐng)教下

引用回帖:

Originally posted by zy020202 at 2011-03-02 21:03:48:
數(shù)據(jù)庫(kù)中的DNA序列有的是全序列，有的僅有編碼區(qū)，你要看好了。
RNA才需要反轉(zhuǎn)錄成cDNA,若需要全基因組包括非編碼區(qū)，最好是用反求基因組學(xué)，通過(guò)提取RNA，RT-PCR得到DNA。

我分子學(xué)的不好啊。我的意思是DNA不是包含內(nèi)含子嗎。
NCBI給出的序列包括內(nèi)含子序列嗎？如果包括內(nèi)含子序列那么我們對(duì)一個(gè)基因擴(kuò)增是不是要提取全RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA后再對(duì)這一基因進(jìn)行擴(kuò)增？還是直接通過(guò)NCBI上的序列設(shè)計(jì)引物進(jìn)行擴(kuò)增？
謝謝回答！

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5樓2011-03-03 17:08:06

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王有朝(金幣+2): 謝謝 2011-03-04 21:39:52

引用回帖:

Originally posted by 王有朝 at 2011-03-03 17:08:06:
我分子學(xué)的不好啊。我的意思是DNA不是包含內(nèi)含子嗎。
NCBI給出的序列包括內(nèi)含子序列嗎？如果包括內(nèi)含子序列那么我們對(duì)一個(gè)基因擴(kuò)增是不是要提取全RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA后再對(duì)這一基因進(jìn)行擴(kuò)增？還是直接通過(guò)NCBI上的 ...

嗯，有的不包括5‘上游和3’下游的非編碼區(qū)，我是用于包裝病毒，這兩個(gè)區(qū)對(duì)病毒粒子很重要的，所以提取RNA后反轉(zhuǎn)錄成cDNA，再構(gòu)建質(zhì)粒轉(zhuǎn)染包裝病毒粒子，你的情況具體分析下吧，我了解也不是很深！

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6樓2011-03-03 21:09:13

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