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[交流] 【求助/交流】抗微管藥物的體外篩選問題

請教各位前輩，我正在做兩個(gè)化合物的抗腫瘤藥理研究，細(xì)胞增殖抑制上做出效果較好，但在細(xì)胞周期上沒有做出結(jié)果，正在尋找其靶點(diǎn)，想在微管方面做一下，看它們有沒有在微管方面有作用，目前查到的資料很少，具體歸結(jié)為兩類，一類是通過細(xì)胞免疫熒光拍照，一種是體外的模型篩選。

1.對(duì)于細(xì)胞免疫熒光方面，想求助一下詳細(xì)的步驟和注意點(diǎn)，并想請高手指點(diǎn)一下對(duì)于腫瘤細(xì)胞株的選擇有沒要求，是不是細(xì)胞核大一點(diǎn)的更利于拍出比較好的照片。

2.對(duì)于體外模型的篩選，想尋求一下具體步驟和要點(diǎn)，查到的資料都是自己提取的微管蛋白，有的是在比色皿中測，有的是用96孔板測，但實(shí)驗(yàn)室沒有提取的條件，不知道有沒有試劑盒，包括純的微管蛋白和緩沖液等，麻煩大家附上具體實(shí)驗(yàn)所需的主要儀器。

謝謝大家能抽空解答，不甚感激！

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1樓 2011-03-02 10:40:39

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1949stone(金幣+1): 鼓勵(lì) 2011-03-02 15:17:38

1、增殖上有效果？直接的實(shí)驗(yàn)證據(jù)是什么？
2、為什么想到細(xì)胞骨架？觀察到細(xì)胞的形態(tài)和運(yùn)動(dòng)能力改變了嗎？

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2樓2011-03-02 11:27:15

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-02 11:27:15:
1、增殖上有效果？直接的實(shí)驗(yàn)證據(jù)是什么？
2、為什么想到細(xì)胞骨架？觀察到細(xì)胞的形態(tài)和運(yùn)動(dòng)能力改變了嗎？

MTT和SRB兩個(gè)細(xì)胞篩選上面都有結(jié)果，細(xì)胞周期和TOP酶抑制也都做了，沒有明顯結(jié)果，所以想到細(xì)胞骨架，Hoechst染色觀察結(jié)果細(xì)胞形態(tài)在很低劑量的情況下就該改變了，之后想針對(duì)微管找靶點(diǎn)的，你有相關(guān)的信息嗎？可以指點(diǎn)一下嗎？

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3樓2011-03-02 12:49:06

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三磷酸腺苷

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1949stone(金幣+2): 繼續(xù)鼓勵(lì) 2011-03-02 15:17:59

1、MTT和SRB都不是增殖的直接證據(jù)。最直接的證據(jù)是Brd-U
2、Hoechst只是染核型，核型變，比如固縮著色變亮，那是凋亡，不直接反映細(xì)胞骨架的問題

因此，你應(yīng)該去研究凋亡

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4樓2011-03-02 14:35:54

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-02 14:35:54:
1、MTT和SRB都不是增殖的直接證據(jù)。最直接的證據(jù)是Brd-U
2、Hoechst只是染核型，核型變，比如固縮著色變亮，那是凋亡，不直接反映細(xì)胞骨架的問題

因此，你應(yīng)該去研究凋亡

凋亡已經(jīng)做過，是有影響的，但老師說這是結(jié)果，不是機(jī)制，還是得找這個(gè)藥物的靶點(diǎn)，所以才想去微管方面尋找，嘗試一下是否是這個(gè)靶點(diǎn)。能否告訴我一下你的QQ或是手機(jī)號(hào)，感覺你是這方面的專家，想多向請教你一下。我的QQ是476617248.郵箱是bo_ting@126.com. 多謝！

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5樓2011-03-02 16:39:05

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lstt09nk(金幣+2): 樓主的第一句~~很符合論壇的宗旨~~ 2011-03-02 18:44:51

引用回帖:

Originally posted by 孤島浪客 at 2011-03-02 16:39:05:
凋亡已經(jīng)做過，是有影響的，但老師說這是結(jié)果，不是機(jī)制，還是得找這個(gè)藥物的靶點(diǎn)，所以才想去微管方面尋找，嘗試一下是否是這個(gè)靶點(diǎn)。能否告訴我一下你的QQ或是手機(jī)號(hào)，感覺你是這方面的專家，想多向請教你一下 ...

呃……本人不接受私下解答……不好意思……還是發(fā)帖公開討論比較好吧

凋亡機(jī)制方面我貌似以前都說過很多了
首先你應(yīng)該去看，這個(gè)藥物引起細(xì)胞哪個(gè)通路依賴性的凋亡（線粒體通路、死亡受體通路？）
測一下caspase-8和9的活性就知道是依賴于哪個(gè)通路或者有cross-talk

解決了這個(gè)問題再進(jìn)一步討論吧

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6樓2011-03-02 17:14:15

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lstt09nk(金幣+2): 鼓勵(lì)~~ 2011-03-02 18:45:09
孤島浪客(金幣+20): 2011-03-03 10:40:42

如果你要確診確實(shí)是凋亡，光有hoechst一個(gè)證據(jù)是不夠的
包括我剛才說的cas活性測定（要測個(gè)cas-3）在內(nèi)
還得做個(gè)Annexin V/PI看看
多方面證據(jù)才能支撐凋亡

還要做LDH，看細(xì)胞都飄起來的時(shí)候LDH釋放有沒有很劇烈地增加，如果增加好多了，可能是凋亡和細(xì)胞毒雙方面的機(jī)制

所以你要做的東西還很多很多

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7樓2011-03-02 17:16:37

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沒事兒，呵呵，我凋亡在A/V上做出有趨勢，Cas-3有趨勢，現(xiàn)在在做Bax、bcl-2，這個(gè)會(huì)繼續(xù)做，但是凋亡上面解釋最多只能說明一個(gè)通路，并不能說明這個(gè)化合物的真正的機(jī)制在哪方面，所以才想往微管方面做的，老師一直希望在微管上做，不希望在凋亡上做太深。

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8樓2011-03-02 18:07:33

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lstt09nk: 實(shí)驗(yàn)上的疑問，歡迎您來木蟲生物版提問~~ 2011-03-02 18:46:24

引用回帖:

Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-02 17:14:15:
呃……本人不接受私下解答……不好意思……還是發(fā)帖公開討論比較好吧

凋亡機(jī)制方面我貌似以前都說過很多了
首先你應(yīng)該去看，這個(gè)藥物引起細(xì)胞哪個(gè)通路依賴性的凋亡（線粒體通路、死亡受體通路？）
測一下c ...

要是你是我導(dǎo)師就好了，呵呵！

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9樓2011-03-02 18:08:40

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Originally posted by 孤島浪客 at 2011-03-02 18:08:40:
要是你是我導(dǎo)師就好了，呵呵！

介個(gè)……大家平輩，相互交流吧~~

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10樓2011-03-02 23:00:24

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rainwander(金幣+1): 鼓勵(lì)積極參與交流~~~ 2011-03-03 11:26:53

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Originally posted by 孤島浪客 at 2011-03-02 18:07:33:
沒事兒，呵呵，我凋亡在A/V上做出有趨勢，Cas-3有趨勢，現(xiàn)在在做Bax、bcl-2，這個(gè)會(huì)繼續(xù)做，但是凋亡上面解釋最多只能說明一個(gè)通路，并不能說明這個(gè)化合物的真正的機(jī)制在哪方面，所以才想往微管方面做的，老師一 ...

如果想研究微管
直接證據(jù)那就去做激光共聚焦，有變就是有變，沒變就是沒變~~
但是，怎么說呢，骨架瓦解和凋亡，誰是雞誰是蛋，在你這個(gè)模型中不好說
時(shí)效是得好好把握的，看誰先發(fā)生

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11樓2011-03-02 23:15:39

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5樓: Originally posted by 孤島浪客 at 2011-03-02 16:39:05:
凋亡已經(jīng)做過，是有影響的，但老師說這是結(jié)果，不是機(jī)制，還是得找這個(gè)藥物的靶點(diǎn)，所以才想去微管方面尋找，嘗試一下是否是這個(gè)靶點(diǎn)。能否告訴我一下你的QQ或是手機(jī)號(hào)，感覺你是這方面的專家，想多向請教你一下 ...

你好，請問你微管靶點(diǎn)方面的實(shí)驗(yàn)做得怎樣了，因?yàn)槲乙蚕胱鲞@方面的研究，因?yàn)閯偨佑|實(shí)驗(yàn)，很多不太懂，想向你請教一下。。。

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12樓2011-09-25 10:52:34

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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖

偶有點(diǎn)疑問，細(xì)胞周期沒結(jié)果，微管實(shí)驗(yàn)還需要做嗎？一般抗微管直接影響細(xì)胞周期吧。不想在凋亡通路上做太深，可以從最近比較熱的血管生成和轉(zhuǎn)移做做。

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13樓2011-09-25 23:46:33

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你好，請問你微管靶點(diǎn)方面的實(shí)驗(yàn)進(jìn)展怎樣了。我們實(shí)驗(yàn)室也準(zhǔn)備做細(xì)胞骨架，想向你請教

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14樓2012-06-12 15:38:11

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