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孤島浪客

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[交流] 【求助/交流】抗微管藥物的體外篩選問題

請(qǐng)教各位前輩，我正在做兩個(gè)化合物的抗腫瘤藥理研究，細(xì)胞增殖抑制上做出效果較好，但在細(xì)胞周期上沒有做出結(jié)果，正在尋找其靶點(diǎn)，想在微管方面做一下，看它們有沒有在微管方面有作用，目前查到的資料很少，具體歸結(jié)為兩類，一類是通過細(xì)胞免疫熒光拍照，一種是體外的模型篩選。

1.對(duì)于細(xì)胞免疫熒光方面，想求助一下詳細(xì)的步驟和注意點(diǎn)，并想請(qǐng)高手指點(diǎn)一下對(duì)于腫瘤細(xì)胞株的選擇有沒要求，是不是細(xì)胞核大一點(diǎn)的更利于拍出比較好的照片。

2.對(duì)于體外模型的篩選，想尋求一下具體步驟和要點(diǎn)，查到的資料都是自己提取的微管蛋白，有的是在比色皿中測(cè)，有的是用96孔板測(cè)，但實(shí)驗(yàn)室沒有提取的條件，不知道有沒有試劑盒，包括純的微管蛋白和緩沖液等，麻煩大家附上具體實(shí)驗(yàn)所需的主要儀器。

謝謝大家能抽空解答，不甚感激！

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1樓 2011-03-02 10:40:39

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孤島浪客

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-02 11:27:15:
1、增殖上有效果？直接的實(shí)驗(yàn)證據(jù)是什么？
2、為什么想到細(xì)胞骨架？觀察到細(xì)胞的形態(tài)和運(yùn)動(dòng)能力改變了嗎？

MTT和SRB兩個(gè)細(xì)胞篩選上面都有結(jié)果，細(xì)胞周期和TOP酶抑制也都做了，沒有明顯結(jié)果，所以想到細(xì)胞骨架，Hoechst染色觀察結(jié)果細(xì)胞形態(tài)在很低劑量的情況下就該改變了，之后想針對(duì)微管找靶點(diǎn)的，你有相關(guān)的信息嗎？可以指點(diǎn)一下嗎？

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3樓2011-03-02 12:49:06

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三磷酸腺苷

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1949stone(金幣+1): 鼓勵(lì) 2011-03-02 15:17:38

1、增殖上有效果？直接的實(shí)驗(yàn)證據(jù)是什么？
2、為什么想到細(xì)胞骨架？觀察到細(xì)胞的形態(tài)和運(yùn)動(dòng)能力改變了嗎？

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2樓2011-03-02 11:27:15

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1949stone(金幣+2): 繼續(xù)鼓勵(lì) 2011-03-02 15:17:59

1、MTT和SRB都不是增殖的直接證據(jù)。最直接的證據(jù)是Brd-U
2、Hoechst只是染核型，核型變，比如固縮著色變亮，那是凋亡，不直接反映細(xì)胞骨架的問題

因此，你應(yīng)該去研究凋亡

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4樓2011-03-02 14:35:54

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引用回帖:

Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-02 14:35:54:
1、MTT和SRB都不是增殖的直接證據(jù)。最直接的證據(jù)是Brd-U
2、Hoechst只是染核型，核型變，比如固縮著色變亮，那是凋亡，不直接反映細(xì)胞骨架的問題

因此，你應(yīng)該去研究凋亡

凋亡已經(jīng)做過，是有影響的，但老師說這是結(jié)果，不是機(jī)制，還是得找這個(gè)藥物的靶點(diǎn)，所以才想去微管方面尋找，嘗試一下是否是這個(gè)靶點(diǎn)。能否告訴我一下你的QQ或是手機(jī)號(hào)，感覺你是這方面的專家，想多向請(qǐng)教你一下。我的QQ是476617248.郵箱是bo_ting@126.com. 多謝！

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5樓2011-03-02 16:39:05

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