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[交流]
【求助/交流】畢赤酵母表達用培養(yǎng)基BMGY BMMY的詳細(xì)配制方法，請賜教。 已有9人參與
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第一次摸索畢赤酵母表達。用的是丁香園 的畢赤酵母表達實驗手冊。做到表達那步。選用BMGY BMMY培養(yǎng)基表達。 關(guān)于此兩種培養(yǎng)基的配制方法。網(wǎng)上查詢配方： BMGY/BMMY：2%蛋白胨，1%酵母提取物，100 mM磷酸鉀緩沖液(pH6.0)，1.34% YNB，4×10-5 生物素，1%甘油/0.5%甲醇。 這個100 mM磷酸鉀緩沖液(pH6.0)要怎樣達到呢？ 按網(wǎng)上某前輩的方法 酵母提取物 10g/L 蛋白胨 20g/L K2HPO4 3g/L KH2PO4 11.8G/L 超純水 895Ml YNB 13.4g/L 121攝氏度滅菌后，培養(yǎng)基是渾濁的。無法使用啊。 所以想問問這兩種培養(yǎng)基，各位的配制方法是怎樣的呢？賜教吧。新人一個，連個培養(yǎng)基都不會配~~~~~幫幫我吧。 |
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susizheng
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*BMGY （Buffered Glycerol-complex Medium ）1L BMMY （Buffered Methanol-complex Medium）1L 1%酵母浸出物，2%蛋白胨，100 mM磷酸鉀 PH6.0， 1.34% YNB 4×10-5%生物素，1%甘油或 0.5%甲醇 1）溶解 10 g 酵母浸出物，20 g 蛋白胨于700 ml 水中 2）滅菌 20 min 3）冷至室溫，加入下列混合液： 100 ml 1M 磷酸鉀緩沖液 PH6.0 100 ml 10×YNB 2 ml 500×B 100 ml 10×GY 4）制 BMMY 時，加入 100ml 10×M 取代 10×GY 5）存于 4 度，可放 2 個月 貯存液： *10×YNB（13.4%酵母氮源堿（YNB）含硫酸銨不含氨基酸） 溶解134 gYNB 于1000 ml水中，過濾除菌，加熱至 YNB 完全溶解，存于 4 度�；蛘哂�34 gYNB（不含硫酸銨不含氨基酸），100 g 硫酸銨進行配制，可放 1 年。注意畢赤酵母在高濃度 YNB 下生長更好。該試劑盒中所用 YNB 的量是釀酒酵母中的兩倍。 *500×生物素（0.02%） 溶解 20 mg 生物素于 100 ml 水中，過濾除菌，放于 4度，可放 1 年 *10×M（5%甲醇） 混合 5 ml 甲醇與 95 ml 水，過濾除菌存于4度，可放2個月 *10×GY（10%甘油） 混合 100 ml 甘油與 900 ml 水，過濾或高壓滅菌，室溫放置，可存放 1 年以上 *1 M 磷酸鉀緩沖液 PH6.0 132 ml 1 M K2HPO4，868 ml 1 M KH2PO4，調(diào)整 PH 值為 6.0±0.1（如果需調(diào) PH 值，用磷酸或 KOH）。過濾或高壓滅菌，室溫下可放 1 年以上 |
7樓2011-03-03 21:02:13
姜大磊
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