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淺淺ZZ新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】植物組織雙向電泳樣品制備方法及注意事項(xiàng) 已有2人參與
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如題，想知道制備蛋白樣品時(shí)材料必須是現(xiàn)采現(xiàn)用么？如果冷凍在-80度冰箱幾天用時(shí)再拿出來(lái)用液氮磨樣可以么？會(huì)不會(huì)有太大影響呢？ 知道情況的大俠說(shuō)下吧，謝謝啦~~~~~~~~~ |
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xhjggl
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- BioEPI: 1
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- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
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可以，但是如果植物中含有較多的二級(jí)次生產(chǎn)物，建議在做2D前，對(duì)樣品進(jìn)行清潔 上海生工有試劑可以用 非干擾型蛋白濃度測(cè)定試劑盒 Non-Interference Protein Assay Kit 產(chǎn)品說(shuō)明: 非干擾型蛋白質(zhì)定量試劑盒是排除決大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)試劑的干擾的光學(xué)定量方法，它可以去除離子，非離子，兩性去污試劑，還原試劑，螯合試劑，載體兩性電解質(zhì)，Tris ，糖，尿素，硫尿，鹽酸胍等變性試劑，對(duì)于在Laemmeli buffer等蛋白質(zhì)上樣緩沖液，2D sample extraction buffer,高濃度的β-mercaptoethanol (<15%) ,脂質(zhì)體中的蛋白質(zhì)也可以定量,蛋白質(zhì)量在0.5-50µg 之間有良好的線性關(guān)系,需要的樣品體積在1-50µl ,特殊的沉淀試劑可以去除掉絕大多數(shù)干擾物質(zhì),被沉淀的蛋白質(zhì)與含有銅的堿性物質(zhì)相混合,未與蛋白質(zhì)相結(jié)合銅在被還原為一價(jià)后與特定的生色試劑反應(yīng),產(chǎn)生特定的480nm吸收波長(zhǎng),所以隨著蛋白質(zhì)的濃度增加,,未與蛋白質(zhì)結(jié)合銅相應(yīng)減少,這樣特定的吸收波長(zhǎng)的吸收值與溶液中的蛋白質(zhì)濃度成反比,這種蛋白質(zhì)定量方法不受氨基酸副鏈和蛋白質(zhì)的種類的影響，本試劑盒可以做250次微量定量。 產(chǎn)品特點(diǎn)： 1．整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程大約只需要40分鐘左右; 2．定量過(guò)程不受到非蛋白的去污試劑，還原試劑，螯合試劑，Tris ，糖，尿素，硫尿等變性試劑，載體兩性電解質(zhì)，化學(xué)藥品，抗生素等的影響; 3．定量范圍在0.5-50µg，只需要1-50ul的樣品; 4．比較適合于對(duì)2D電泳用的細(xì)胞或組織裂解液所提取的蛋白樣品直接進(jìn)行定量。 編號(hào) 包裝 價(jià)格 產(chǎn)地 SK3071 250 Assays 500 生工 Perfect-FOCUS™ 2D電泳樣品清除試劑 Description: Perfect-FOCUS™ is designed to clean and concentrate protein samples that give poor protein spot resolution during 2D electrophoresis. Protein samples containing interfering agents, including ionic detergents, metal ions, substrates, substrate analogs, inhibitors, and other charged molecules, routinely result in smeared or low resolution gels.Protein solutions are treated with Perfect-FOCUS™ that quantitatively precipitates the proteins, which are subsequently collected by centrifugation. The non-protein interfering agents are washed away and the protein pellet is ready to be solubilized in an appropriate sample loading buffer.The collected protein has conductivity <50µS and is substantially free from non-protein agents, which improves spot resolution and greatly reduces spot streaking.Perfect-FOCUS™ treated protein samples are compatible with mass spectrometry analysis and show identical peptide spectra.Store：18～25℃。 Features: Removes interfering agents from protein solutions.;Conductivity lower than 50µS after treatment.;Samples free from non-protein agents;Treated samples suitable for running 2D gels;the Kit suitable for 50 x 1-100µl protein solutions. suitable for concentrating and cleaning protein samples for isoelectric focusing (IEF) and 2D-gel electrophoresis applications. 編號(hào) 包裝 價(jià)格 產(chǎn)地 786-124 50 Assays 1925 G Bios 2D 電泳樣品提取緩沖液系列 產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 本系列以尿素為基礎(chǔ)的2D電泳樣品提取液，是以干性尿素和其它非離子，兩性去污試劑為基礎(chǔ)，外加一定體積的水化液構(gòu)成，含有尿素的溶液在溫度過(guò)高（>37℃）和高PH值會(huì)的情況下造成分解，而溫度過(guò)低可能造成析出，同時(shí)尿素就會(huì)在溶液體系中逐步和氰酸銨達(dá)成一定的平衡，異氰酸會(huì)與蛋白質(zhì)的N末端、賴氨酸、精氨酸的氨基以及半胱氨酸的巰基發(fā)生氨甲�；磻�(yīng)。所以在進(jìn)行2D電泳樣品提取時(shí)，采用新鮮的以尿素為基礎(chǔ)的2D電泳樣品提取液，有很重要的意義，本系列水化后,可以產(chǎn)生50ml的提取試劑，本系列溶解液對(duì)疏水性蛋白質(zhì)的溶解能力，由弱到強(qiáng)，可以根據(jù)您樣品的特性，選擇使用合適的2D電泳樣品提取緩沖液,同時(shí)本系列試劑也可以用于對(duì)IPG Strips的水化。 產(chǎn)品組成： PL037 Extraction buffer I : Urea powder,diluent ：NP-40 PL038 Extraction buffer II: Urea powder, diluent ：CHAPS PL039 Extraction buffer III: Urea ,Thiourea powder, diluent:CHAPS PL 040 Extraction buffer IV: Urea ,Thiourea ,ASB-16 powder, diluent:CHAPS PL041 Extraction buffer V: Urea ,Thiourea ,SB3-10 powder , diluent:CHAPS PL042 Extraction buffer VI: Urea ,Thiourea , NDSB201 powder, diluent: CHAPS 運(yùn)輸和儲(chǔ)存： 在常溫下運(yùn)輸，干粉4度保使用方法： 1． 根據(jù)實(shí)驗(yàn)的樣本數(shù)，稱量出一定克數(shù)的干粉，對(duì)于Extraction buffer I，II和III ，按照每克干粉加入1.15ml 的稀釋液；對(duì)于Extraction buffer IV，V和VI，按照每克干粉加入1.ml 的稀釋液。 2． 根據(jù)實(shí)驗(yàn)的要求，加入一定量的還原試劑，蛋白酶抑制試劑，載體兩性電解質(zhì)，溴酚藍(lán)等。 3． 在渦旋震蕩器上，充分震蕩，直到形成均一，透明的溶液。對(duì)于Extraction buffer V，需要30度，水浴10分鐘左右，以促進(jìn)溶解。 4． 對(duì)于沒(méi)有使用完的溶液，請(qǐng)分裝，-70度保存，并且盡量在一個(gè)月內(nèi)使用完。 5．取一支1.5ml 的離心管，加入如下的細(xì)胞或組織：100mg動(dòng)物組織或107個(gè)培養(yǎng)的細(xì)胞；經(jīng)過(guò)酶消化去除細(xì)胞壁的50mg濕重的酵母；50ul的昆蟲(chóng)細(xì)胞沉淀；50mg細(xì)菌；加入500ul 的新鮮的溶解液，經(jīng)過(guò)超聲破碎，每次30 S ， 5～6次，每次間隔1 min：或100mg植物組織經(jīng)過(guò)液氮研磨，加入500ul 的新鮮的溶解液。將經(jīng)過(guò)以上步驟處理的在離心管中的細(xì)胞或組織震蕩10分鐘，室溫12000rpm 離心10分鐘離心取上清。 6. 沉淀的細(xì)胞碎片或組織可以再加入50-100ul 的新鮮的溶解液，震蕩10分鐘后，室溫12000rpm 離心10分鐘后取上清。 7．合并操作步驟5-6中的上清，用于2D電泳。 存，稀釋液常溫保存,保質(zhì)期 一年。 |
2樓2011-03-10 22:55:43
淺淺ZZ
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謝謝回帖，做蛋白方面的實(shí)驗(yàn)好費(fèi)錢費(fèi)力，正在糾結(jié)要不要繼續(xù)做下去呢。。。不過(guò)你的回復(fù)還是對(duì)我有一定幫助的，謝謝！ 3樓2011-03-15 15:06:36
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