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銀蟲(chóng) (初入文壇)

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[交流] 【求助/交流】求解蛋白質(zhì)分離純化的難題

大家好，最近在做蛋白質(zhì)的分離純化實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)中遇到了一些難題，還請(qǐng)高手指點(diǎn)。
我做真菌產(chǎn)一種酶的分離純化，但是該菌也產(chǎn)很多多糖，不知用什么辦法除去？
對(duì)發(fā)酵液鹽析的蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，經(jīng)過(guò)離心，得到的片狀物浮在液面上，管底部液體澄清，沒(méi)有沉淀，請(qǐng)問(wèn)這是什么原因，怎么解決？Sample Text

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1樓 2011-03-11 18:15:09

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冼亮淀粉酶

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發(fā)酵液中加入硫酸銨達(dá)到一定的飽和度之后，理論上是絕對(duì)有蛋白質(zhì)沉淀下來(lái)的，即使沒(méi)有蛋白質(zhì)沉淀，那至少發(fā)酵液里的菌絲碎片和培養(yǎng)基不溶成分也會(huì)沉淀。沒(méi)有沉淀就說(shuō)明沉淀跑到液體上層去了。這令我想到一個(gè)現(xiàn)象，雙水相。

硫酸銨是無(wú)機(jī)鹽，達(dá)到一定濃度時(shí)會(huì)與一些有機(jī)物形成雙水相，上相為有機(jī)相，下相為無(wú)機(jī)相。

建議嘗試一下雙水相去除發(fā)酵液雜質(zhì)和有機(jī)雜質(zhì)，之后無(wú)機(jī)相繼續(xù)加入硫酸銨鹽析。這樣，碎片、色素、有機(jī)物、雜質(zhì)蛋白質(zhì)都能去除很多。

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9樓2011-03-11 21:49:21

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~明曉溪~

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我也遇到同樣的事情，實(shí)際上那些漂浮物可以丟掉了，估計(jì)是一些多糖，你不放心的話(huà)，跑個(gè)電泳看看。我覺(jué)的管壁上多少會(huì)有些蛋白的，你洗洗看看。

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3樓2011-03-11 18:35:22

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zhengfan1109

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Originally posted by 609351499 at 2011-03-11 18:15:09:
大家好，最近在做蛋白質(zhì)的分離純化實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)中遇到了一些難題，還請(qǐng)高手指點(diǎn)。
我做真菌產(chǎn)一種酶的分離純化，但是該菌也產(chǎn)很多多糖，不知用什么辦法除去？
對(duì)發(fā)酵液鹽析的蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，經(jīng)過(guò)離心，得到 ...

走一次凝膠色譜試試，分離到的組分測(cè)下糖的含量。

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4樓2011-03-11 20:46:55

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weishengsu5

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學(xué)習(xí)下

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5樓2011-03-11 20:55:07

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