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[交流]
【求助/交流】有使用過λDE3溶源化試劑盒的進來看看...
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有沒有人用過λDE3 lysogenization kit制備過溶源化菌的 求教一下，需要注意點什么啊 做了幾次一直沒有成功 很郁悶 ..... |
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susizheng
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★ ★ ★
nestzhao(金幣+3): 2011-03-16 21:04:26
rainwander(金幣+3): 鼓勵分享自己的實驗經(jīng)驗~不錯 2011-03-16 22:38:46
nestzhao(金幣+3): 2011-03-16 21:04:26
rainwander(金幣+3): 鼓勵分享自己的實驗經(jīng)驗~不錯 2011-03-16 22:38:46
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我找了下實驗記錄， 我的步驟是，OD長到0.5左右后， 3）取1uL菌液與1 uL ƛDE3 phage lysate，3.3 ul helper phage lysate，1 uL selection phage lysate于37 ℃水浴30 min。（由于所取三種裂解液量較少，可事先取一定體積的三種裂解液混勻，使用時取所需的量） 4）加入100 uL的LB培養(yǎng)基稀釋后梯度涂布LB平板，37 ℃培養(yǎng)過夜 一般10 uL菌液能長出比較適合的菌落數(shù)。菌落長得少打點，你就可以看到未溶原化的菌落出現(xiàn)噬菌斑，溶原化成功的菌落就比較圓滑。 你如果完全按照說明書做，肯定長得密密麻麻，看不到噬菌斑。 |
6樓2011-03-16 14:09:00
7樓2011-03-16 21:13:58
susizheng
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9樓2011-03-17 08:26:45
rainwander: 引用回復(fù)的時候，引用你自己的帖子了？~ 2011-03-26 17:45:23
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不好意思再向你請教一下： 我又重新試了下，按照你的方法，我在平板上得到了合適數(shù)量的菌落 但是，在下一步進行溶源化鑒定的時候，仍舊沒有出現(xiàn)噬菌斑：也就是說明書所說的溶源化后的菌，在加入tester phage 后用雙層平板法，在只有LB的平板上出現(xiàn)的噬菌斑較小，在含有IPTG的平板上能夠有較大的噬菌斑。但是，我做的情況是，出現(xiàn)的菌落驗證時兩種平板都沒有出現(xiàn)噬菌斑，而試劑盒里面的HMS174(DE3) Positive Control Glycerol Stock，也沒有出現(xiàn)噬菌斑，而我們實驗室已有的E coli BL21（DE3）在兩個平板上出現(xiàn)噬菌斑，描述和說明書一致。 我就是很迷茫。。。。。 |
10樓2011-03-25 21:43:23
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不好意思再向你請教一下：  我又重新試了下，按照你的方法，我在平板上得到了合適數(shù)量的菌落 但是，在下一步進行溶源化鑒定的時候，仍舊沒有出現(xiàn)噬菌斑：也就是說明書所說的溶源化后的菌，在加入tester phage 后用雙層平板法，在只有LB的平板上出現(xiàn)的噬菌斑較小，在含有IPTG的平板上能夠有較大的噬菌斑。但是，我做的情況是，出現(xiàn)的菌落驗證時兩種平板都沒有出現(xiàn)噬菌斑，而試劑盒里面的HMS174(DE3) Positive Control Glycerol Stock，也沒有出現(xiàn)噬菌斑，而我們實驗室已有的E coli BL21（DE3）在兩個平板上出現(xiàn)噬菌斑，描述和說明書一致。 我就是很迷茫。。。。。 [ Last edited by nestzhao on 2011-3-26 at 18:48 ] |
11樓2011-03-26 18:46:55
susizheng
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