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【求助】有關(guān)DEAE裝柱問題
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初來咋到的我現(xiàn)在用DEAE-纖維素純化粗多糖,上玻璃柱,有關(guān)填料用量與所上樣品的量之間該怎么樣處理? 還有這種填料裝柱前預(yù)處理和裝柱要求該怎么樣。還有怎么樣解決洗脫慢這個問題?需要做分級接收嗎?謝謝了。 |
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(1)DE52陰離子交換劑干粉處理 先將100g的DE52陰離子交換劑干粉倒入250ml燒杯中,加入 150ml蒸餾水浸泡3h,去除雜質(zhì);再在150ml的0.5M的HCL溶液中浸泡1-2h,再用無離子水或蒸餾水洗至pH值中性或PH4以上,并將其在抽濾漏斗中抽干;將抽干的離子交換劑浸泡在150ml的0.5M的NaOH溶液中1-2h,再用無離子水或蒸餾水將其洗至中性。 (2) DEAE-纖維素52裝柱(2cm,50cm) 將層析柱清洗干凈垂直固定到層析架上,加1/3體積的無離子水,打開下出液口,水流暢通,即刻將小燒杯中裝有的柱材,輕輕倒入層析柱中,凝膠自然慢慢沉降再層析柱底部,凝膠沉積直到離層析柱上端1.5-2cm處,停止裝柱,然后再用0.5M的NaOH淋洗2-3柱體積(約30ml),最后用水洗淋洗至流出液pH值顯中性即可。 |
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我也在做這個,柱子是【1,60】的,用40g纖維素。 (1)DE52陰離子交換劑干粉處理 先將30g的DE52陰離子交換劑干粉倒入250ml燒杯中,加入 150ml蒸餾水浸泡3h,去除雜質(zhì);再在150ml的0.5M的HCL溶液中浸泡1-2h,再用無離子水或蒸餾水洗至pH值中性或PH4以上,并將其在抽濾漏斗中抽干;將抽干的離子交換劑浸泡在150ml的0.5M的NaOH溶液中1-2h,再用無離子水或蒸餾水將其洗至中性。 (2) DEAE-纖維素52裝柱(2cm,50cm) 將層析柱清洗干凈垂直固定到層析架上,加1/3體積的無離子水,打開下出液口,水流暢通,即刻將小燒杯中裝有的柱材,輕輕倒入層析柱中,凝膠自然慢慢沉降再層析柱底部,凝膠沉積直到離層析柱上端1.5-2cm處,停止裝柱,然后再用0.5M的NaOH淋洗2-3柱體積(約30ml),最后用水洗淋洗至流出液pH值顯中性即可。 |
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