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wjswj木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
【求助/交流】質(zhì)粒的不相容性
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資料： 中文名稱(chēng)：質(zhì)粒不相容性 英文名稱(chēng)：plasmid incompatibility 定義1：細(xì)菌質(zhì)粒分類(lèi)的一種標(biāo)準(zhǔn)，指在無(wú)選擇壓力的條件下，親緣關(guān)系密切的不同質(zhì)�；蛲徊幌嗳萑旱馁|(zhì)粒不能穩(wěn)定共存于同一宿主細(xì)胞，在細(xì)胞增殖過(guò)程中將有一種被排斥的現(xiàn)象。 所屬學(xué)科：生物化學(xué)與分子生物學(xué)（一級(jí)學(xué)科）；核酸與基因（二級(jí)學(xué)科） 定義2：同一類(lèi)型質(zhì)粒不能在同一細(xì)胞中并存的現(xiàn)象。 同種的或親緣關(guān)系相近的兩種質(zhì)粒不能同時(shí)穩(wěn)定地保持在一個(gè)細(xì)胞內(nèi)的現(xiàn)象，稱(chēng)為質(zhì)粒不相容性。當(dāng)一種新的質(zhì)粒進(jìn)入已經(jīng)含有質(zhì)粒的細(xì)胞中時(shí)，若兩種質(zhì)粒同源或近緣，它們就會(huì)競(jìng)爭(zhēng)資源，而競(jìng)爭(zhēng)的結(jié)果就是一個(gè)勝利另一個(gè)則被消除。但此過(guò)程需要幾代或幾十代或更長(zhǎng)的細(xì)菌繁殖周期，而并不是一個(gè)快速的過(guò)程。質(zhì)粒被分為兩大組，同組中的質(zhì)粒會(huì)相互競(jìng)爭(zhēng)排斥。 如果使帶有同種的或親緣關(guān)系相近質(zhì)粒的細(xì)菌彼此雜交，質(zhì)粒DNA的傳遞可受抑制，但這種稱(chēng)為表面排斥（surface exclusion），以便與不相容性相區(qū)別。不相容現(xiàn)象的機(jī)制尚未詳細(xì)闡明，可能是在質(zhì)粒DNA復(fù)制的某個(gè)階段起相互排斥的作用。這種現(xiàn)象是質(zhì)粒分類(lèi)的主要指標(biāo)。此外，整合到寄主染色體中的質(zhì)粒和自主性質(zhì)粒之間也具有不相容性，例如在大腸桿菌的Hfr菌株細(xì)胞中，自主性質(zhì)粒F因子就不能穩(wěn)定地保持。 我的試驗(yàn)現(xiàn)象： 最近工作需要，要完成數(shù)百個(gè)質(zhì)粒（質(zhì)粒來(lái)源相同，插入片段不同，外源片段的引物也不同）的制備，也就是轉(zhuǎn)化鑒定提取這個(gè)步驟。但算下來(lái)工作量不小，于是嘗試一次轉(zhuǎn)化中轉(zhuǎn)化數(shù)十種質(zhì)粒。問(wèn)題來(lái)了，在隨后的菌落PCR（多重?cái)U(kuò)增）鑒定過(guò)程中發(fā)現(xiàn)我挑取的一個(gè)單菌落作為模板擴(kuò)增，總是能得到不止一種外源片段產(chǎn)物。開(kāi)始以為可能是存在污染的情況，但陰性對(duì)照比較明顯的否定了這個(gè)情況。 討論：資料中提到的幾代或幾十代或更長(zhǎng)的時(shí)間為多久？同源同種不同外源片段的質(zhì)粒在同一宿主中能穩(wěn)定多久？希望有相關(guān)經(jīng)驗(yàn)的大俠來(lái)指教一下。TA克隆/建文庫(kù)的時(shí)候就可以完成質(zhì)粒不相容的過(guò)程，那多質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化呢？需要多久可以完成這個(gè)過(guò)程？ |
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dhd997(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-03-29 08:44:12
wjswj(金幣+5): 謝謝你的經(jīng)驗(yàn)，我的目的是丟掉細(xì)菌中少的那些質(zhì)粒，多的留下，不加抗生素會(huì)加速這個(gè)過(guò)程吧？ 2011-04-02 14:42:19
dhd997(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-03-29 08:44:12
wjswj(金幣+5): 謝謝你的經(jīng)驗(yàn)，我的目的是丟掉細(xì)菌中少的那些質(zhì)粒，多的留下，不加抗生素會(huì)加速這個(gè)過(guò)程吧？ 2011-04-02 14:42:19
| "資料中提到的幾代或幾十代或更長(zhǎng)的時(shí)間為多久?",我在做發(fā)酵過(guò)程中明顯發(fā)現(xiàn)當(dāng)大腸桿菌傳到100代以后就會(huì)出現(xiàn)明顯的質(zhì)粒丟失，在300代時(shí)這種現(xiàn)象會(huì)變的更加明顯。我前段時(shí)間想把一個(gè)細(xì)胞內(nèi)的質(zhì)粒給丟失掉，只需要在43度條件下培養(yǎng)18個(gè)小時(shí)后，轉(zhuǎn)接到0.015%SDS+LB培養(yǎng)基37度培養(yǎng)，18個(gè)小時(shí)后檢測(cè)發(fā)現(xiàn)有70%的質(zhì)粒已經(jīng)丟失了。 |
7樓2011-03-28 20:50:53
chinosaur
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8樓2011-03-28 22:08:41
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