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天官賜福金蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化體積為什么不能超過(guò)感受態(tài)的十分之一 已有11人參與
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看各個(gè)生物試劑公司的感受態(tài)說(shuō)明書(shū)上講，轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒體積不能超過(guò)感受態(tài)體積的十分之一，初不明緣由，查閱一番，有云“這樣是保證感受態(tài)細(xì)胞過(guò)量”。 既然是想讓質(zhì)粒進(jìn)入感受太細(xì)胞中，為何不是讓質(zhì)粒過(guò)量呢？ 小生最近在作酵母雙雜交，對(duì)于加入的轉(zhuǎn)化質(zhì)粒的體積是否一如轉(zhuǎn)化大腸桿菌那樣？望各位大蝦不吝賜教�。�！ |
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保證細(xì)胞過(guò)量時(shí)為了保證每一個(gè)質(zhì)粒都能轉(zhuǎn)進(jìn)去細(xì)胞里 1.質(zhì)粒畢竟要珍貴一點(diǎn)，細(xì)胞好養(yǎng)又好做； 2.其實(shí)質(zhì)粒濃度高點(diǎn)也沒(méi)事，但是轉(zhuǎn)化效率差不多的； 3.試劑公司處于對(duì)自己的名聲負(fù)責(zé)，假如你用50ul質(zhì)粒和100ul質(zhì)粒同樣的轉(zhuǎn)化 ，都得到了100個(gè)克隆，那么你不覺(jué)得讓你用50ul質(zhì)粒做轉(zhuǎn)化更能顯示出試劑公司的試劑的NB之處嘛 4.質(zhì)粒濃度太大了，容易讓同一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)化進(jìn)多個(gè)質(zhì)粒，對(duì)細(xì)胞本身是負(fù)擔(dān)，回印務(wù)高死亡率的 |
3樓2011-04-11 09:14:05
西瓜
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2樓2011-04-11 08:57:02
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4樓2011-04-11 10:30:39
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5樓2011-04-11 10:31:00
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西瓜:編輯內(nèi)容 2011-04-11 14:01
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看了樓上幾位的，其實(shí)個(gè)人認(rèn)為這個(gè)轉(zhuǎn)化是看具體情況 1:一般感受態(tài)細(xì)胞呢，比如10b神馬的自己做，轉(zhuǎn)化的時(shí)候要看轉(zhuǎn)什么東西進(jìn)去了，轉(zhuǎn)質(zhì)粒（含重組的）少量，即2ul入50，60,70ul的感受態(tài)細(xì)胞均可以，如果是連接產(chǎn)物呢？可以多轉(zhuǎn)化一些。。。5ul 6ul都行。 2：其實(shí)合適的比例對(duì)于轉(zhuǎn)化效率的高低至關(guān)重要，還有就是電轉(zhuǎn)化儀的電壓，轉(zhuǎn)化管都是有一定關(guān)系的。。 3：回復(fù)jhu132llh ：質(zhì)粒其實(shí)要看什么質(zhì)粒的，不過(guò)我覺(jué)得不太珍貴吧？幾微升轉(zhuǎn)化進(jìn)大腸桿菌，提質(zhì)�？梢蕴崛『芏嗟摹�。。。 4：回復(fù)ATP：有試過(guò)將多個(gè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)一個(gè)感受態(tài)嗎？怎么進(jìn)行驗(yàn)證各種質(zhì)粒是否已經(jīng)成功轉(zhuǎn)入呢？如果載體上帶有抗性呢？怎么驗(yàn)證？ [ Last edited by 西瓜 on 2011-4-11 at 14:01 ] |
6樓2011-04-11 11:39:09
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關(guān)于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化體積原因有： （1）如果加入質(zhì)粒體積太大的話會(huì)影響感受態(tài)的的緩沖液的緩沖能力，從而影響感受態(tài)的轉(zhuǎn)化效率 （2）我們知道經(jīng)處理后的感受態(tài)細(xì)胞膜上產(chǎn)生了很多孔洞，當(dāng)熱激時(shí)吸附在細(xì)胞壁上的DNA會(huì)從孔洞進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，當(dāng)質(zhì)粒濃度太大后會(huì)阻塞孔洞，導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率降低 |
8樓2011-04-11 12:37:24
三磷酸腺苷
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