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天官賜福金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】質(zhì)粒的轉化體積為什么不能超過感受態(tài)的十分之一 已有11人參與
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看各個生物試劑公司的感受態(tài)說明書上講，轉化的質(zhì)粒體積不能超過感受態(tài)體積的十分之一，初不明緣由，查閱一番，有云“這樣是保證感受態(tài)細胞過量”。 既然是想讓質(zhì)粒進入感受太細胞中，為何不是讓質(zhì)粒過量呢？ 小生最近在作酵母雙雜交，對于加入的轉化質(zhì)粒的體積是否一如轉化大腸桿菌那樣？望各位大蝦不吝賜教�。�！ |
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jhu132llh
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1949stone(金幣+3): 鼓勵 2011-04-11 12:13:20
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保證細胞過量時為了保證每一個質(zhì)粒都能轉進去細胞里 1.質(zhì)粒畢竟要珍貴一點，細胞好養(yǎng)又好做； 2.其實質(zhì)粒濃度高點也沒事，但是轉化效率差不多的； 3.試劑公司處于對自己的名聲負責，假如你用50ul質(zhì)粒和100ul質(zhì)粒同樣的轉化 ，都得到了100個克隆，那么你不覺得讓你用50ul質(zhì)粒做轉化更能顯示出試劑公司的試劑的NB之處嘛 4.質(zhì)粒濃度太大了，容易讓同一個細胞轉化進多個質(zhì)粒，對細胞本身是負擔，回印務高死亡率的 |
3樓2011-04-11 09:14:05
西瓜
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10樓2011-04-11 14:05:24
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1949stone(EPI+1): 2011-04-11 12:12:34
西瓜:編輯內(nèi)容 2011-04-11 14:01
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
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西瓜:編輯內(nèi)容 2011-04-11 14:01
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看了樓上幾位的，其實個人認為這個轉化是看具體情況 1:一般感受態(tài)細胞呢，比如10b神馬的自己做，轉化的時候要看轉什么東西進去了，轉質(zhì)粒（含重組的）少量，即2ul入50，60,70ul的感受態(tài)細胞均可以，如果是連接產(chǎn)物呢？可以多轉化一些。。。5ul 6ul都行。 2：其實合適的比例對于轉化效率的高低至關重要，還有就是電轉化儀的電壓，轉化管都是有一定關系的。。 3：回復jhu132llh ：質(zhì)粒其實要看什么質(zhì)粒的，不過我覺得不太珍貴吧？幾微升轉化進大腸桿菌，提質(zhì)�？梢蕴崛『芏嗟�。。。。 4：回復ATP：有試過將多個質(zhì)粒轉化進一個感受態(tài)嗎？怎么進行驗證各種質(zhì)粒是否已經(jīng)成功轉入呢？如果載體上帶有抗性呢？怎么驗證？ [ Last edited by 西瓜 on 2011-4-11 at 14:01 ] |
6樓2011-04-11 11:39:09
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