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[交流]
【求助/交流】質(zhì)粒的不相容性
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資料： 中文名稱：質(zhì)粒不相容性 英文名稱：plasmid incompatibility 定義1：細菌質(zhì)粒分類的一種標準，指在無選擇壓力的條件下，親緣關系密切的不同質(zhì)�；蛲徊幌嗳萑旱馁|(zhì)粒不能穩(wěn)定共存于同一宿主細胞，在細胞增殖過程中將有一種被排斥的現(xiàn)象。 所屬學科：生物化學與分子生物學（一級學科）；核酸與基因（二級學科） 定義2：同一類型質(zhì)粒不能在同一細胞中并存的現(xiàn)象。 同種的或親緣關系相近的兩種質(zhì)粒不能同時穩(wěn)定地保持在一個細胞內(nèi)的現(xiàn)象，稱為質(zhì)粒不相容性。當一種新的質(zhì)粒進入已經(jīng)含有質(zhì)粒的細胞中時，若兩種質(zhì)粒同源或近緣，它們就會競爭資源，而競爭的結果就是一個勝利另一個則被消除。但此過程需要幾代或幾十代或更長的細菌繁殖周期，而并不是一個快速的過程。質(zhì)粒被分為兩大組，同組中的質(zhì)粒會相互競爭排斥。 如果使帶有同種的或親緣關系相近質(zhì)粒的細菌彼此雜交，質(zhì)粒DNA的傳遞可受抑制，但這種稱為表面排斥（surface exclusion），以便與不相容性相區(qū)別。不相容現(xiàn)象的機制尚未詳細闡明，可能是在質(zhì)粒DNA復制的某個階段起相互排斥的作用。這種現(xiàn)象是質(zhì)粒分類的主要指標。此外，整合到寄主染色體中的質(zhì)粒和自主性質(zhì)粒之間也具有不相容性，例如在大腸桿菌的Hfr菌株細胞中，自主性質(zhì)粒F因子就不能穩(wěn)定地保持。 我的試驗現(xiàn)象： 最近工作需要，要完成數(shù)百個質(zhì)粒（質(zhì)粒來源相同，插入片段不同，外源片段的引物也不同）的制備，也就是轉化鑒定提取這個步驟。但算下來工作量不小，于是嘗試一次轉化中轉化數(shù)十種質(zhì)粒。問題來了，在隨后的菌落PCR（多重擴增）鑒定過程中發(fā)現(xiàn)我挑取的一個單菌落作為模板擴增，總是能得到不止一種外源片段產(chǎn)物。開始以為可能是存在污染的情況，但陰性對照比較明顯的否定了這個情況。 討論：資料中提到的幾代或幾十代或更長的時間為多久？同源同種不同外源片段的質(zhì)粒在同一宿主中能穩(wěn)定多久？希望有相關經(jīng)驗的大俠來指教一下。TA克隆/建文庫的時候就可以完成質(zhì)粒不相容的過程，那多質(zhì)粒的轉化呢？需要多久可以完成這個過程？ |
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wjswj(金幣+5): 謝謝你的經(jīng)驗，我的目的是丟掉細菌中少的那些質(zhì)粒，多的留下，不加抗生素會加速這個過程吧？ 2011-04-02 14:42:19
dhd997(金幣+2): 鼓勵交流 2011-03-29 08:44:12
wjswj(金幣+5): 謝謝你的經(jīng)驗，我的目的是丟掉細菌中少的那些質(zhì)粒，多的留下，不加抗生素會加速這個過程吧？ 2011-04-02 14:42:19
| "資料中提到的幾代或幾十代或更長的時間為多久?",我在做發(fā)酵過程中明顯發(fā)現(xiàn)當大腸桿菌傳到100代以后就會出現(xiàn)明顯的質(zhì)粒丟失，在300代時這種現(xiàn)象會變的更加明顯。我前段時間想把一個細胞內(nèi)的質(zhì)粒給丟失掉，只需要在43度條件下培養(yǎng)18個小時后，轉接到0.015%SDS+LB培養(yǎng)基37度培養(yǎng)，18個小時后檢測發(fā)現(xiàn)有70%的質(zhì)粒已經(jīng)丟失了。 |
7樓2011-03-28 20:50:53
2樓2011-03-23 14:00:01
3樓2011-03-24 11:15:40
4樓2011-03-24 12:22:42
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