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caijhua銅蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】熒光定量融解曲線怪異 已有5人參與
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融解曲線有突峰，是什么原因？請(qǐng)各位大俠指點(diǎn)！ 前面兩張圖為正常的融解曲線圖跟融解峰圖，但后面兩張就出現(xiàn)了不正常，融解曲線有突起！ [ Last edited by caijhua on 2011-3-24 at 15:20 ] |
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xuehu2008
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2樓2011-03-24 15:28:33
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3樓2011-03-24 15:38:03
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4樓2011-03-24 15:49:48
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溶解曲線不止一個(gè)主峰 1、引物設(shè)計(jì)不佳：避免二聚體和發(fā)夾結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)； 2、引物濃度不佳：適當(dāng)調(diào)整引物濃度； 3、退火溫度低：提高退火溫度； 4、鎂離子濃度過(guò)高：適當(dāng)降低鎂離子濃度； 5、模板中有基因組的污染：通過(guò)引物設(shè)計(jì)避免非特異擴(kuò)增。 |
5樓2011-03-24 17:20:07
西瓜
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6樓2011-03-24 18:19:05
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a415398462 同志把主要可能原因都說(shuō)了。我只說(shuō)說(shuō)自己的看法。 你的雜峰出現(xiàn)在主峰之后，不像引物二聚體的雜峰（一般出現(xiàn)在70多度），可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增。可以通過(guò)提高退火溫度，減少延伸時(shí)間來(lái)增加反應(yīng)的特異性。 如果和前面正常的圖用的是同一對(duì)引物，那就是某次反應(yīng)的問(wèn)題了�？杀３諴CR程序、體系不變，更換模板、引物、試劑等，看看能不能找出問(wèn)題。 如果正常的和出問(wèn)題的兩次PCR用的模板一樣，我建議你先重新稀釋引物。 |
7樓2011-03-24 18:27:15
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