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caijhua銅蟲 (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】熒光定量融解曲線怪異 已有5人參與
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融解曲線有突峰，是什么原因？請各位大俠指點！ 前面兩張圖為正常的融解曲線圖跟融解峰圖，但后面兩張就出現(xiàn)了不正常，融解曲線有突起！ [ Last edited by caijhua on 2011-3-24 at 15:20 ] |
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amisking(金幣+2): 鼓勵發(fā)帖交流。 2011-03-24 19:59:48
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a415398462 同志把主要可能原因都說了。我只說說自己的看法。 你的雜峰出現(xiàn)在主峰之后，不像引物二聚體的雜峰（一般出現(xiàn)在70多度），可能出現(xiàn)非特異擴增。可以通過提高退火溫度，減少延伸時間來增加反應(yīng)的特異性。 如果和前面正常的圖用的是同一對引物，那就是某次反應(yīng)的問題了�？杀３諴CR程序、體系不變，更換模板、引物、試劑等，看看能不能找出問題。 如果正常的和出問題的兩次PCR用的模板一樣，我建議你先重新稀釋引物。 |
7樓2011-03-24 18:27:15
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