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【求助/交流】怎么做都提不出DNA，請高手幫一下忙嘍�。。�！ 已有23人參與
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怎么做都提不出DNA，請高手幫一下忙嘍！�。�！ 我是從青霉菌里提的，開始用的SDS法，液氮研磨+500ul抽提緩沖液65℃水浴1h后，12000離心10min，加兩次氯仿：異戊醇（24：1）后離心10Min,12000收集上清，加等體積異丙醇-20放置30min以上，13500離心，用75%乙醇洗無菌風吹干后加無菌水溶的，結果跑電泳只有RNA。然后做了好多次都這樣。又換的氯化芐法，（液氮研磨0.1g+500ul緩液+125uLDE 10%SDS+300uL氯化芐，50℃，1h）做這個我連醋酸鈉PH都調到5.2了，結果還是沒有。就崩潰了,麻煩高手給指導一下�。�！ [ Last edited by 1949stone on 2011-4-21 at 12:54 ] |
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
1949stone(EPI+1): 哈哈 epi來也 2011-04-21 12:58:46
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
1949stone(EPI+1): 哈哈 epi來也 2011-04-21 12:58:46
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如果有了RNA，當然就是表示已經破胞成功了，因為細胞內才有RNA。 我用的抽提液配方為 成分 濃度 NaCl 200mmol/L EDTA-Na2 4mmol/L SDS 2% Tris-HCl(pH=8.0) 100mmol/L 與你的不一樣，我用的方法和你的也不一樣 2.4.14.1真菌總DNA的提取 （1）接種菌株至液體培養(yǎng)基中，28℃，180rpm振蕩培養(yǎng)3天； （2）用滅菌紗布過濾，并壓干菌體； （3）將菌絲體倒入研缽（滅菌并預冷），迅速倒入液氮，研磨至粉末狀； （4）將粉末移至1.5mL的EP管中，加入600µL真菌提取液； （5）加等體積苯酚/氯仿，輕輕倒轉混合，10000rpm離心10min； （6）取400µL上清液移入新的1.5mlLEP管，重復步驟（5）之后以等體積氯仿抽提一次； （7）取上清液，加入兩倍體積無水乙醇，-20℃放置30min； （8）10000rpm 離心10min，75%乙醇洗沉淀2次，真空干燥； （9）以20µL 1×TE 溶解沉淀； （10）電泳檢測總DNA的濃度。 |
22樓2011-04-16 14:36:31
★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
1949stone(金幣+1): 有理 2011-04-21 12:53:50
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
1949stone(金幣+1): 有理 2011-04-21 12:53:50
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2樓2011-03-28 20:00:30
河外生命
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3樓2011-03-28 21:39:19
4樓2011-03-29 09:12:05
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