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[交流] 【求助/交流】求PCR二次擴(kuò)增引物

我做的是厭氧反應(yīng)器中微生物群落的變化，現(xiàn)在已經(jīng)做好DGGE了，下面就是膠回收后在PCR，然后測(cè)序。我第一次PCR時(shí)用的引物是341FGC和534R，想二次擴(kuò)增時(shí)用引物GC2-341和534R，以及測(cè)序之前用引物GC1-S和534R，請(qǐng)問(wèn)哪位高手能告訴我GC2-341和GC1-S的引物序列，我想讓上海生工幫我合成，萬(wàn)分感謝！！！急�。。�！

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1樓 2011-03-29 16:07:04

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tingspdf

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txzhuwenxiu6285(金幣+1):謝謝參與
txzhuwenxiu6285(金幣+1): 2011-03-29 22:39:10

幫樓主頂起，順便問(wèn)問(wèn)樓主用什么方法回收的DGGE片段？

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2樓2011-03-29 17:24:32

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我買的是專門的回收試劑盒回收的，下步就不知道這個(gè)引物具體什么設(shè)計(jì)了，你能幫幫我嗎

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3樓2011-03-29 22:38:37

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tingspdf

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Originally posted by txzhuwenxiu6285 at 2011-03-29 22:38:37:
Sample Text
我買的是專門的回收試劑盒回收的，下步就不知道這個(gè)引物具體什么設(shè)計(jì)了，你能幫幫我嗎

這兩個(gè)引物名稱你是從哪查的？

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4樓2011-03-30 09:04:16

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nienie2008

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我也想做類似的實(shí)驗(yàn)，樓主能寫(xiě)明回收試劑盒的具體名稱嗎？我上網(wǎng)查了，大部分試劑盒都是針對(duì)瓊脂糖凝膠的。另外，不知樓主從哪查的這些引物，用PCR引物測(cè)序不行嗎？

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5樓2011-03-30 15:38:06

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Originally posted by tingspdf at 2011-03-30 09:04:16:
這兩個(gè)引物名稱你是從哪查的？

我們這有個(gè)老師在日本呆了好幾年她一直是做DGGE的她當(dāng)時(shí)也是做的厭氧反應(yīng)器中的微生物菌群，她建議我查這兩個(gè)引物的。

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6樓2011-03-31 22:54:01

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dhd997(金幣+3): 熱心。 2011-04-01 08:43:41

引用回帖:

Originally posted by nienie2008 at 2011-03-30 15:38:06:
我也想做類似的實(shí)驗(yàn)，樓主能寫(xiě)明回收試劑盒的具體名稱嗎？我上網(wǎng)查了，大部分試劑盒都是針對(duì)瓊脂糖凝膠的。另外，不知樓主從哪查的這些引物，用PCR引物測(cè)序不行嗎？

上海生工的UNIQ-10柱式PAGE膠回收試劑盒你可以到他們公司頁(yè)面上下載這個(gè)試劑盒的PDF說(shuō)明，看看你能不能用；另外，你是不是研究的具體的哪個(gè)微生物，然后PCR產(chǎn)物可以直接測(cè)序，而我的是一個(gè)反應(yīng)器中的整個(gè)微生物菌群，所以我是做完DGGE后，將優(yōu)勢(shì)菌種的條帶切下，然后回收，再PCR，最后再測(cè)序的，而上面兩個(gè)引物就是我二次增幅所想要用的引物，但是我一直找不到這個(gè)序列，所以糾結(jié)，雖然用之前的引物也可以，但可能擴(kuò)增的特異性不好，那樣測(cè)序的結(jié)果可能不太好。

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7樓2011-03-31 22:59:06

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sunbio

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8樓2011-04-01 10:52:14

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sai00fuji

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9樓2011-04-05 23:06:45

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良緣百合

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DGGE之前的PCR,引物帶夾子是為防止完全解鏈，DGGE后的PCR引物為什么還要帶夾子呢？不知道是什么原理啊
我按“張永生，2010，貝加爾針茅”的那篇的文章擴(kuò)增了341f和518r，準(zhǔn)備DGGE后的PCR用……

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10樓2011-05-25 08:23:36

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王冠傑

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直接找生工問(wèn)不行嗎

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11樓2015-05-13 08:48:17

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halfbeer

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12樓2015-05-13 10:01:22

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