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dhd997(金幣+5, EPI+1): good 2011-05-16 08:56:36
(1) 從超低溫冰箱中取出保存樣品 (5 g)；
(2) 于室溫融化；
(3) 加入13.5 mL CTAB 抽提緩沖液和50 μL 蛋白酶K 貯存液；
(4) 離心管于37oC 225 rpm 水平振蕩30 min；
(5) 加入1.5 mL20%SDS；
(6) 65oC 水浴2 h，每隔15 min 輕輕顛倒數(shù)次；
(7) 室溫6,000g 離心10 min，收集上清液，轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的50 mL 離心管中；
(8) 沉淀中再加入4.5 mL 提取液和0.5 mL 20%SDS，輕輕渦旋至混勻；
(9) 浸入液氮中冷凍3 min 后，于沸水中煮沸3 min；
(10) 室溫6,000g 離心10 min，收集上清液，與上次上清液合并；
(11) 重復(fù)(8)、(9)、(10)一次；
(12) 將三次提取所獲上清液與等體積的苯酚：氯仿(1:1 v/v) 混合，搖勻后于4 oC
12,000g 離心10 min；
(13) 將上層水相轉(zhuǎn)移至一新的50 mL 離心管中，加入等體積的氯仿：異戊醇(24:1)，
混勻后于4 oC 12,000g 離心10 min；
(14) 再次轉(zhuǎn)移上清至一新的離心管中，加入0.6 倍體積的異丙醇于室溫沉淀1 h；
(15) 室溫12,000g 離心20 min；
(16) 收集沉淀，用預(yù)冷的70%乙醇洗滌沉淀；
(17) 向離心管中加入1 mL TE，于4 oC 放置過夜，分裝保存于‐20 oC。 |
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