| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1974 | 回復(fù): 10 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖,點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】關(guān)于提取基因組DNA過程中遇到的難題
|
|||
|
最近在提取基因組DNA,遇到一個難題。 方法如下: 1. 將待測菌體和模式菌株培養(yǎng)至對數(shù)生長期,取50ml培養(yǎng)液,4℃ 14,000rpm離心5min。 2. 加5ml 0.85% NaCl溶液,充分懸浮后4℃ 14,000rpm離心5min,棄上清。 3. 加3ml STE 溶液,充分懸浮后加30μl(100mg/ml)溶菌酶,混勻后37℃溫浴60 min。 4. 加330μl 10%SDS,加40μl蛋白酶K(20mg/ml),37℃溫浴2h。 5. 加入5MNaCl(850μl),使終濃度為1M,充分混勻。 6. 加等體積的酚:氯仿:異戊醇(25:24:1),充分混勻,4℃14,000rpm,離心5min,吸上層水相于另一干凈離心管中。 7. 再加等體積的氯仿:異戊醇(24:1),混勻后4℃ 6,000rpm,離心10min,吸上層水相于另一干凈離心管中。 8. 加入5μl RNase(12.5mg/ml),37℃溫浴60min。 9. 重復(fù)步驟6和步驟7,直至中間無蛋白層。 10. 加等倍體積的預(yù)冷異丙醇,用玻璃棒纏出絲狀DNA。 11.用70%的乙醇進(jìn)行脫鹽處理后自然風(fēng)干。 現(xiàn)提取同一屬的四株菌,結(jié)果其它3株很容易就提取出來了,而且DNA量還比較大,但是有一株無論如何也不能在最后卷出DNA。 該菌培養(yǎng)3或4d,除蛋白時發(fā)現(xiàn)蛋白層很厚,培養(yǎng)2d的話除蛋白時蛋白層比較薄。這是什么原因?為什么這個菌這么難搞定? 同時鏡檢觀察4d 和 2d 的菌體都沒有自溶現(xiàn)象。 該菌為革蘭氏陰性菌,換用CTAB法提取,最后仍是無法卷出DNA絲(離心有沉淀)。初始菌量很大,加了很多溶菌酶和蛋白酶K,破壁應(yīng)該沒什么問題,可就是無法得到那種卷出的DNA絲。 [ Last edited by 802311820 on 2011-4-14 at 20:36 ] |
» 搶金幣啦!回帖就可以得到:
+2/102
+1/83
+1/71
+1/40
+1/40
+1/23
+1/15
+1/10
+1/7
+1/7
+1/6
+1/5
+1/4
+1/3
+1/3
+1/3
+1/3
+1/2
+1/1
+1/1
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +4 | @MZB382400 2026-03-28 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 071000生物學(xué)求調(diào)劑,初試成績343 +7 | 小小甜面團(tuán) 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
[考研] 壓國家一區(qū)線,求導(dǎo)師收留,有恩必謝! +7 | 迷人的哈哈 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | QiMing7 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
[考研] 394求調(diào)劑 +3 | 好事多磨靜候佳?/a> 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +12 | PolarBear11 2026-03-26 | 12/600 |
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +7 | 腳滑的守法公民 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
[考研] 305求調(diào)劑 +5 | 哇盧卡庫 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
[考研] 085601 材料工程 313分 求調(diào)劑 +5 | Ong3 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
[考研] 一志愿211,335分,0856,求調(diào)劑院校和導(dǎo)師 +4 | 傾____蕭 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
[考研] 調(diào)劑 +3 | 李嘉圖·S·路 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +9 | 小蠟新筆 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
[考研]
|
鐘llll 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
[考研] 086000生物與醫(yī)藥292求調(diào)劑 +6 | 小小陳小小 2026-03-22 | 9/450 |
|
|
[考研] 309求調(diào)劑 +4 | gajsj 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
[考研] 0854AI CV方向招收調(diào)劑 +4 | 章小魚567 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +15 | Zhao anqi 2026-03-22 | 15/750 |
|
|
[考研] 一志愿北化315 求調(diào)劑 +3 | akrrain 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
[考研]
|
黃粱一夢千年 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
[考研] 384求調(diào)劑 +3 | 子系博 2026-03-22 | 6/300 |
|