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xiaoyu1014126

木蟲 (正式寫手)

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[交流] 【求助/交流】表達(dá)載體轉(zhuǎn)化后,提取的質(zhì)粒和原來(lái)不一樣了啊

表達(dá)載體構(gòu)建好以后，轉(zhuǎn)化進(jìn)pET29a，從轉(zhuǎn)化子中重新提取質(zhì)粒，發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒大小部隊(duì)了，打了大約600bp，但是酶切驗(yàn)證還是有我連上去的目的片段，太糾結(jié)了��！
有沒(méi)有給解釋下的啊~~~
郁悶中

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1樓 2011-04-13 11:38:07

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天使托

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★
xiaoyu1014126(金幣+1): 2011-04-13 16:20:14
amisking(金幣+1): 鼓勵(lì)發(fā)帖交流。 2011-04-13 21:22:14

你提取出來(lái)的重組質(zhì)粒大小很有可能會(huì)變化，因?yàn)橘|(zhì)粒在菌中的形態(tài)是變化的，你可以做酶切驗(yàn)證，然后跑電泳驗(yàn)證，跑電泳的時(shí)候可以將你當(dāng)時(shí)酶切質(zhì)粒和酶切的基因也點(diǎn)上作為對(duì)照，這樣如果條帶正確那么重組質(zhì)粒也是沒(méi)有任何問(wèn)題的！
當(dāng)然了也可以用你提取出來(lái)的質(zhì)粒作為模板進(jìn)行PCR驗(yàn)證你的目的基因。

祝好運(yùn)！

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2樓2011-04-13 13:47:57

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空谷幽風(fēng)

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xiaoyu1014126(金幣+1): 2011-04-13 16:21:12

你是不是直接拿剛提取的質(zhì)粒跑膠看大小了？

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3樓2011-04-13 15:46:45

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xiaoyu1014126

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引用回帖:

Originally posted by 空谷幽風(fēng) at 2011-04-13 15:46:45:
你是不是直接拿剛提取的質(zhì)粒跑膠看大小了？

剛提取的質(zhì)粒跑膠是不是對(duì)膠上片段大小有影響��？

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4樓2011-04-13 16:21:59

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空谷幽風(fēng)

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xiaoyu1014126(金幣+2): 2011-04-13 20:26:54
amisking(EPI+1): good！ 2011-04-13 21:23:25

引用回帖:

Originally posted by xiaoyu1014126 at 2011-04-13 16:21:59:
剛提取的質(zhì)粒跑膠是不是對(duì)膠上片段大小有影響��？

拿剛提的質(zhì)粒跑膠檢測(cè)大小是不準(zhǔn)確的。常用的DNA Marker只能標(biāo)定線性DNA的大小，而提取的質(zhì)粒有環(huán)狀、開(kāi)環(huán)、線性三種類型，所以跑膠時(shí)會(huì)開(kāi)到三條帶。好像現(xiàn)在有賣專門標(biāo)定質(zhì)粒的Marker了，不過(guò)我還沒(méi)用過(guò)。因此要確定一個(gè)質(zhì)粒的大小只有經(jīng)過(guò)單酶切后再跑膠才可以。另外從不同細(xì)胞里提出的同一種質(zhì)粒帶型一般也是不同的

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5樓2011-04-13 16:57:18

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csdyg

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最終目的做表達(dá)的質(zhì)粒最好測(cè)序

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6樓2011-04-14 02:52:25

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