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[交流]
【求助/交流】透明圈大小和蛋白酶濃度的關(guān)系
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| 我想做透明圈大小和蛋白酶濃度關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線。我想求助具體的方法，是將不同濃度的蛋白酶濾紙片貼在酪蛋白培養(yǎng)基上，然后培養(yǎng)一段時間測量透明圈大小嗎？ |
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★ ★ ★
rainwander(金幣+3, EPI+1): 鼓勵交流~~~ 2011-04-13 17:16:22
rainwander(金幣+3, EPI+1): 鼓勵交流~~~ 2011-04-13 17:16:22
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沒必要糾纏在平板透明圈與酶活力高低的關(guān)系這個問題上，沒有相關(guān)性的。我碩士論文上對這個問題有討論，與蛋白酶產(chǎn)生菌的篩選道理是相通的。 4.2關(guān)于淀粉降解微生物的篩選方法 在菌種初篩時依據(jù)在含淀粉平板上產(chǎn)生降解圈來判斷微生物是否產(chǎn)淀粉酶，一般認(rèn)為H/D值高即產(chǎn)酶活力高，比值小就被淘汰。但本工作發(fā)現(xiàn)H/D值值的大小與產(chǎn)酶活力的高低之間并沒有明顯的相關(guān)性，有的H/D值雖然不大，但液體培養(yǎng)時酶活并不低。所以，淀粉酶產(chǎn)生菌產(chǎn)淀粉酶活力的高低應(yīng)以多次液體培養(yǎng)搖瓶發(fā)酵測酶活的復(fù)篩驗證為準(zhǔn)。 個人推測H/D值的高低可能與以下因素有關(guān)： ①淀粉平板的厚�。合鄬τ谕粋�微生物來說，在培養(yǎng)條件相同的情況下，由于產(chǎn)酶量一定，故平板越厚H/D值越小，平板越薄H/D值越大； ②平板的形狀：由于培養(yǎng)皿在生產(chǎn)過程中不可能做到完全一致，所以造成很多培養(yǎng)皿的底部不是完全平整的，甚至有較大變形，這樣就會造成在同一塊淀粉平板上培養(yǎng)基的厚薄不一致，引起系統(tǒng)誤差； ③各種微生物所產(chǎn)淀粉酶在淀粉平板上的穩(wěn)定性不一致，產(chǎn)胞外蛋白酶活力的高低也不一致。有的微生物所產(chǎn)淀粉酶比較穩(wěn)定，就能在平板上存活較久，有利于形成較大的H/D值�；蛘哂械奈⑸锼a(chǎn)蛋白酶活力較低，對淀粉酶的降解作用較弱，這也有利于形成較大的H/D值。 產(chǎn)淀粉酶時間早晚不一致，早產(chǎn)酶則酶對淀粉的降解時間長，利于產(chǎn)生較大的降解圈。 |
4樓2011-04-13 16:32:40
2樓2011-04-13 16:23:45
★ ★
rainwander(金幣+2): 鼓勵交流~~~ 2011-04-13 17:15:42
rainwander(金幣+2): 鼓勵交流~~~ 2011-04-13 17:15:42
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我做了近一年的纖維素酶產(chǎn)生菌篩選工作。主要是利用剛果紅進行篩選。初篩是主要以H/D進行篩選，但是，這不準(zhǔn)確，準(zhǔn)確的掌握酶活，則需要進行發(fā)酵復(fù)篩。 水解圈可以從一定程度上反應(yīng)菌落酶活性的大小。 但是，比水解圈更為準(zhǔn)確的是水解圈直徑/菌落直徑的比值可以更好的指示蛋白酶酶活性的高低。 但是，這種關(guān)系，并不是非常精確的，如果真的要精確，需要進一步測定酶活。 雖然H/D不精確，但是，在大規(guī)模篩選或者工作量較大時，不失為一個有效的判斷方法。 [ Last edited by mche2005 on 2011-4-13 at 17:41 ] |
3樓2011-04-13 16:32:08
5樓2011-04-13 17:37:28
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