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[交流]
【求助/交流】透明圈大小和蛋白酶濃度的關(guān)系
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| 我想做透明圈大小和蛋白酶濃度關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線。我想求助具體的方法，是將不同濃度的蛋白酶濾紙片貼在酪蛋白培養(yǎng)基上，然后培養(yǎng)一段時(shí)間測(cè)量透明圈大小嗎？ |
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microxy
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2樓2011-04-13 16:23:45
mche2005
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rainwander(金幣+2): 鼓勵(lì)交流~~~ 2011-04-13 17:15:42
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我做了近一年的纖維素酶產(chǎn)生菌篩選工作。主要是利用剛果紅進(jìn)行篩選。初篩是主要以H/D進(jìn)行篩選，但是，這不準(zhǔn)確，準(zhǔn)確的掌握酶活，則需要進(jìn)行發(fā)酵復(fù)篩。 水解圈可以從一定程度上反應(yīng)菌落酶活性的大小。 但是，比水解圈更為準(zhǔn)確的是水解圈直徑/菌落直徑的比值可以更好的指示蛋白酶酶活性的高低。 但是，這種關(guān)系，并不是非常精確的，如果真的要精確，需要進(jìn)一步測(cè)定酶活。 雖然H/D不精確，但是，在大規(guī)模篩選或者工作量較大時(shí)，不失為一個(gè)有效的判斷方法。 [ Last edited by mche2005 on 2011-4-13 at 17:41 ] |
3樓2011-04-13 16:32:08
冼亮淀粉酶
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rainwander(金幣+3, EPI+1): 鼓勵(lì)交流~~~ 2011-04-13 17:16:22
rainwander(金幣+3, EPI+1): 鼓勵(lì)交流~~~ 2011-04-13 17:16:22
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沒必要糾纏在平板透明圈與酶活力高低的關(guān)系這個(gè)問題上，沒有相關(guān)性的。我碩士論文上對(duì)這個(gè)問題有討論，與蛋白酶產(chǎn)生菌的篩選道理是相通的。 4.2關(guān)于淀粉降解微生物的篩選方法 在菌種初篩時(shí)依據(jù)在含淀粉平板上產(chǎn)生降解圈來判斷微生物是否產(chǎn)淀粉酶，一般認(rèn)為H/D值高即產(chǎn)酶活力高，比值小就被淘汰。但本工作發(fā)現(xiàn)H/D值值的大小與產(chǎn)酶活力的高低之間并沒有明顯的相關(guān)性，有的H/D值雖然不大，但液體培養(yǎng)時(shí)酶活并不低。所以，淀粉酶產(chǎn)生菌產(chǎn)淀粉酶活力的高低應(yīng)以多次液體培養(yǎng)搖瓶發(fā)酵測(cè)酶活的復(fù)篩驗(yàn)證為準(zhǔn)。 個(gè)人推測(cè)H/D值的高低可能與以下因素有關(guān)： ①淀粉平板的厚�。合鄬�(duì)于同一個(gè)微生物來說，在培養(yǎng)條件相同的情況下，由于產(chǎn)酶量一定，故平板越厚H/D值越小，平板越薄H/D值越大； ②平板的形狀：由于培養(yǎng)皿在生產(chǎn)過程中不可能做到完全一致，所以造成很多培養(yǎng)皿的底部不是完全平整的，甚至有較大變形，這樣就會(huì)造成在同一塊淀粉平板上培養(yǎng)基的厚薄不一致，引起系統(tǒng)誤差； ③各種微生物所產(chǎn)淀粉酶在淀粉平板上的穩(wěn)定性不一致，產(chǎn)胞外蛋白酶活力的高低也不一致。有的微生物所產(chǎn)淀粉酶比較穩(wěn)定，就能在平板上存活較久，有利于形成較大的H/D值�；蛘哂械奈⑸锼a(chǎn)蛋白酶活力較低，對(duì)淀粉酶的降解作用較弱，這也有利于形成較大的H/D值。 產(chǎn)淀粉酶時(shí)間早晚不一致，早產(chǎn)酶則酶對(duì)淀粉的降解時(shí)間長(zhǎng)，利于產(chǎn)生較大的降解圈。 |
4樓2011-04-13 16:32:40
mche2005
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冼亮淀粉酶
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wolfebst(金幣+2): 謝謝討論 2011-04-16 16:36:07
wolfebst(EPI+1): 2011-04-16 21:10:05
wolfebst(金幣+2): 謝謝討論 2011-04-16 16:36:07
wolfebst(EPI+1): 2011-04-16 21:10:05
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“產(chǎn)酶早，往往產(chǎn)酶時(shí)間短，既然時(shí)間短，那么，降解圈就不一定大了。” 我想知道你為什么說“往往”，因?yàn)槟愕慕Y(jié)論“降解圈就不一定大了”是以“既然時(shí)間短”為前提的，所以我在意你的“往往”的出處。如果有什么文獻(xiàn)或者實(shí)驗(yàn)支持，我想學(xué)習(xí)一下。 你的附件我下載看了，發(fā)現(xiàn)字跡模糊，在實(shí)驗(yàn)步驟里有用手寫的字，我想知道是出自哪本書，哪一年出版，第一版是哪一年。 另外，附件中關(guān)于蛋白質(zhì)篩選的論述主要集中于一個(gè)菌株誘變產(chǎn)生酶活力提高的突變株的篩選，并非從環(huán)境樣品中篩選，環(huán)境樣品中含有的微生物種類繁多，產(chǎn)酶種類更多，不同于同一個(gè)菌株誘變得到的突變株篩選，產(chǎn)酶種類就只看菌株基因組內(nèi)有多少個(gè)這個(gè)酶的基因了，假如就只有一個(gè)，那么整個(gè)基因組那么大，突變發(fā)生在酶的基因序列上的可能性就少了。所以說這個(gè)酶的種類也是值得考慮的。請(qǐng)看樓主之前發(fā)帖 http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=3044192 附件中提到降解圈徑比不與酶活力嚴(yán)格相關(guān)，應(yīng)以發(fā)酵產(chǎn)酶為最終標(biāo)準(zhǔn)，這與我的看法是一致的。請(qǐng)看附件中第四頁(yè)的70%和第八頁(yè)的65%。而且附件中關(guān)于培養(yǎng)基的厚薄和培養(yǎng)皿底部的形狀也有與我相似的論述，請(qǐng)看第四頁(yè)尾部和第五頁(yè)開始部分。 關(guān)于平板降解圈的可能性很多，內(nèi)肽酶和外肽酶對(duì)降解圈的貢獻(xiàn)也是不一樣的。你說的“產(chǎn)酶早，但是產(chǎn)酶時(shí)間短，降解圈不一定大”也是可能存在的。 最后總結(jié)，對(duì)于同一個(gè)菌株誘變株的篩選，可以比較嚴(yán)格按照降解圈徑比來初篩，但是對(duì)于篩選環(huán)境樣品中的微生物，不必拘泥于降解圈徑比，要把標(biāo)準(zhǔn)稍微放寬一些，某些徑比不大的微生物也要放過，進(jìn)入到下一步的復(fù)篩，以免漏過真正的高產(chǎn)菌株。 [ Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2011-4-16 at 16:43 ] |
6樓2011-04-16 16:33:20
7樓2014-12-05 09:32:01
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