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[交流]
【求助/交流】分離產(chǎn)蛋白酶菌株
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我想從海水中分離產(chǎn)蛋白酶的菌株，現(xiàn)在有兩個方案，不知道哪個更合理。 1、將不同稀釋度的海水涂布在2116E培養(yǎng)基，先從海水中分離出不同的菌株，然后將這些菌株分別點種于酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基上，測量菌落直徑以及透明圈直徑，最后對分泌蛋白酶的菌株進行鑒定。 2、直接將不同稀釋梯度的海水涂布于酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基，測量菌落直徑以及透明圈直徑，對菌株進行鑒定。 這兩個方法哪個寫論文的時候更合理？ 我現(xiàn)在是用的海水配制的培養(yǎng)基，可是我們學校這邊的海水不是很清澈，用濾紙過濾還是有些渾濁，離心一下是很清澈，但這樣會不會把一些營養(yǎng)物質(zhì)除去了？還有就是我用酪蛋白瓊脂篩選出來的菌株，在不同的平板上很可能篩選到的是同一種菌，我怎么鑒定它們是不是同一種？我看了一些文章說從海水中分離出來多少多少株菌，其中有多少株有什么什么酶活性，我是要對我分離出來的每個菌都進行鑒定嗎？那樣工作量會很大。 [ Last edited by nancyyazi on 2011-4-6 at 19:25 ] |
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nancyyazi(金幣+1):謝謝參與
nancyyazi(金幣+10): 2011-04-06 17:55:36
rainwander(金幣+2, EPI+1): 鼓勵交流~~~獎勵一下~ 2011-04-06 23:30:20
nancyyazi(金幣+1):謝謝參與
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要知道用哪種方法，就首先要知道篩選的原理。蛋白酶是細胞必需的，每種生物都會產(chǎn)生，用于降解自身鈍化的蛋白質(zhì)，所以就要看你需要的蛋白酶產(chǎn)生菌是怎樣的微生物了，或者說你需要微生物來產(chǎn)生具有怎樣的特性的蛋白酶。 撇開這個，先說說2116E和酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基的配方。我在網(wǎng)上找到這兩個配方： 2116E培養(yǎng)基：http://wenku.baidu.com/view/0ae2124c767f5acfa1c7cdf3.html 含有酵母膏和蛋白胨，都是很好的碳源和氮源，但是不能指示蛋白酶產(chǎn)生菌的降解圈 酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基：http://www.hopebiol.com/standard/ldbqz.html 牛肉浸膏是很好的碳源和氮源，還含有酪蛋白，能指示蛋白酶產(chǎn)生菌的降解圈。 但是酵母膏、牛肉浸膏和蛋白胨是不一樣的，可能導致微生物生長狀況不一樣。2116E培養(yǎng)基上能生長的微生物不一定能在酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基上良好生長和產(chǎn)生降解圈，所以建議直接使用酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基。你想想，如果把2116E培養(yǎng)基上能生長的微生物全部都接種到酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基上，你得多做多少事情，還不如直接涂布在酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基平板上看水解圈的直接。如果你投稿論文，審稿人有可能會問這個問題，你可要預先做好思想準備。當然，如果你還有別的想法，必須用第一種方法，就就當我沒說過吧。 有個問題需要注意，海水和模擬海水弄出來的營養(yǎng)鹽或者人工海水都是不同的，所以培養(yǎng)基要用海水來配。海水采集的時候最好別靠近河、陸地和港口，以防鹽分不好和有油污等物污染，采集回來之后最好高溫高壓滅菌，殺死里面的微生物，不滅菌，放久了里面長得花花綠綠的全是水藻，說不定還有線蟲之類的惡心東西。可以先過濾再滅菌，滅菌過后放著不管，到配培養(yǎng)基的時候再過濾一次。當然，如果不過濾也不滅菌，就那么放在實驗室也行，那就美其名曰：陳海水，也是可以發(fā)文章的。 我用海水來篩選過淀粉酶產(chǎn)生菌，篩得到的個別微生物跟陸地上采集的樣品篩出來的看著不一樣，而且就是紅樹林泥土樣品，用海水和淡水來配置培養(yǎng)基，篩選出來的微生物生長情況也是不同的。 于是高下立判—— |
3樓2011-04-06 00:37:37
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哪里和 抑菌圈扯上關(guān)系了？？？？？ 7樓2011-04-06 14:33:01
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
rainwander(金幣+2): 鼓勵交流~~~ 2011-04-06 23:31:05
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
rainwander(金幣+2): 鼓勵交流~~~ 2011-04-06 23:31:05
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“我現(xiàn)在是用的海水配制的培養(yǎng)基，可是我們學校這邊的海水不是很清澈，用濾紙過濾還是有些渾濁�！� 做實驗最嚴謹?shù)氖切枰ＷC可重復性，所以實驗用的試劑藥品包括水都最好是能保持一致的，如果海水不清澈，那就說明要么是有人類活動的痕跡了，是靠近港口或者內(nèi)陸河交匯之類的，或者是城市污水排放造成，要么就是特別嚴重的洋流，不過基本不可能了，所以這種海水的成分可能不能保持恒定，所以你下一次采集海水樣品估計跟上一次的有一點不同。這種海水即使是離心之后能確保非常澄清，那也不應該用。成分保持恒定的海水應該是在不靠近陸地，人類活動不太頻繁的地方采集的，有SCI文章用的就是在海面以下多少米采集的，而且記錄經(jīng)緯度。當然，如果你不是要求那么嚴謹，就不用這樣做，但是假如是想投稿SCI論文，那么就要思考這個問題，因為審稿人可能會問這個關(guān)于實驗重復性的問題，編輯倒是不會問的。其實實際操作起來也不算太難的，因為是靠海的地方，不說客輪，漁船也是有的，漁船作業(yè)的地方一般不靠岸的，就是人類活動較少的地方，人類活動太頻繁的地方魚類不多，被嚇跑了，你就跟他們聯(lián)系好，帶點酒菜上去嘮嗑一下，實在不行就出點錢當是船票就搞定了，記得帶上學生證，不要被懷疑成偷魚的，帶上裝海水的桶罐，繩子船上如果有就不用帶。用繩子系好鐵桶，沉下去，再拉上來，這樣就沒有漁船的油污了。 “離心一下是很清澈，但這樣會不會把一些營養(yǎng)物質(zhì)除去了” 離心只是把一些懸濁物離心下來而已，即使不離心，用這樣的海水來配置培養(yǎng)基，滅菌之后還是渾濁的。還是上面說的，搭個漁船去采集海面下的海水，就不會渾濁了。離心不會把營養(yǎng)物質(zhì)去掉的，而且你要海水的原因是需要里面的各種紛繁復雜的鹽，營養(yǎng)物在配置培養(yǎng)基的時候會自己加進去的。盡量采集成分比較恒定的海水，搭個漁船去采集海面下的海水，有機物污染比較少，成分比較恒定。 “還有就是我用酪蛋白瓊脂篩選出來的菌株，在不同的平板上很可能篩選到的是同一種菌，我怎么鑒定它們是不是同一種？我看了一些文章說從海水中分離出來多少多少株菌，其中有多少株有什么什么酶活性，我是要對我分離出來的每個菌都進行鑒定嗎？” 首先需要區(qū)分“同一種菌”和“菌株”的概念，“種”是分類學上的概念，界門綱目科屬種亞種變種；“株”不是分類學上的概念，帶有很大人為的意義。比如說我篩選得到一株“真菌菌株”命名為“真菌1-95”，經(jīng)過ITS序列和形態(tài)學鑒定之后，發(fā)現(xiàn)是屬于青霉屬，可能為嗜松青霉（可以看我的已授權(quán)專利）。在這個專利里，“種”為“青霉屬嗜松青霉種”，“菌株”為“青霉1-95”。當然，很多人篩選得到的微生物可以在分類學上隸屬于同一種菌，這些微生物在分類學上是相同的，但可以被他們的擁有者命名為不同的名稱，就是屬于不同實驗室的不同的“菌株”。雖然屬于同一種菌，但是它們的基因組可能會稍有不同，所產(chǎn)的酶或者酶的性質(zhì)也會有不同的。 在不同的平板上生長出來的微生物是同一種菌的情況是絕對可以存在的，而且大多數(shù)情況下都是這樣的，當然你也不必全都鑒定，那樣確實很花費時間金錢，先結(jié)合實驗室需要，你到底需要什么樣的菌，什么樣的蛋白酶？先從菌和酶的特性入手篩選，偏酸偏堿中性？形態(tài)上一樣的菌可能是不同的種，也可能產(chǎn)酶情況不一樣，需要結(jié)合再深一層的要求來篩選，而不要看著一大批菌長得像就只保留其中的某一個，那樣就不是篩選了。先問清楚導師，接下來需要什么樣的菌什么樣的酶，不然就留下一大堆平板不知道下一步怎么做，丟也不是，不丟也不是，還礙地方。 至于文章里說篩選得到多少菌株，這也不是嚴謹?shù)谋硎龇绞剑瑖乐數(shù)膽撌钦f篩選得到多少株菌，它們分別產(chǎn)什么酶，隸屬于什么屬，不一定要到種，但屬是應該到的。我覺得你說的那篇可能是國內(nèi)的文章。 直接在2116E里面加酪蛋白應該是可以的。 |
12樓2011-04-06 19:56:09
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