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nancyyazi銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】分離產(chǎn)蛋白酶菌株
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我想從海水中分離產(chǎn)蛋白酶的菌株，現(xiàn)在有兩個(gè)方案，不知道哪個(gè)更合理。 1、將不同稀釋度的海水涂布在2116E培養(yǎng)基，先從海水中分離出不同的菌株，然后將這些菌株分別點(diǎn)種于酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基上，測(cè)量菌落直徑以及透明圈直徑，最后對(duì)分泌蛋白酶的菌株進(jìn)行鑒定。 2、直接將不同稀釋梯度的海水涂布于酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基，測(cè)量菌落直徑以及透明圈直徑，對(duì)菌株進(jìn)行鑒定。 這兩個(gè)方法哪個(gè)寫(xiě)論文的時(shí)候更合理？ 我現(xiàn)在是用的海水配制的培養(yǎng)基，可是我們學(xué)校這邊的海水不是很清澈，用濾紙過(guò)濾還是有些渾濁，離心一下是很清澈，但這樣會(huì)不會(huì)把一些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)除去了？還有就是我用酪蛋白瓊脂篩選出來(lái)的菌株，在不同的平板上很可能篩選到的是同一種菌，我怎么鑒定它們是不是同一種？我看了一些文章說(shuō)從海水中分離出來(lái)多少多少株菌，其中有多少株有什么什么酶活性，我是要對(duì)我分離出來(lái)的每個(gè)菌都進(jìn)行鑒定嗎？那樣工作量會(huì)很大。 [ Last edited by nancyyazi on 2011-4-6 at 19:25 ] |
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冼亮淀粉酶
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nancyyazi(金幣+1):謝謝參與
nancyyazi(金幣+10): 2011-04-06 17:55:36
rainwander(金幣+2, EPI+1): 鼓勵(lì)交流~~~獎(jiǎng)勵(lì)一下~ 2011-04-06 23:30:20
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要知道用哪種方法，就首先要知道篩選的原理。蛋白酶是細(xì)胞必需的，每種生物都會(huì)產(chǎn)生，用于降解自身鈍化的蛋白質(zhì)，所以就要看你需要的蛋白酶產(chǎn)生菌是怎樣的微生物了，或者說(shuō)你需要微生物來(lái)產(chǎn)生具有怎樣的特性的蛋白酶。 撇開(kāi)這個(gè)，先說(shuō)說(shuō)2116E和酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基的配方。我在網(wǎng)上找到這兩個(gè)配方： 2116E培養(yǎng)基：http://wenku.baidu.com/view/0ae2124c767f5acfa1c7cdf3.html 含有酵母膏和蛋白胨，都是很好的碳源和氮源，但是不能指示蛋白酶產(chǎn)生菌的降解圈 酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基：http://www.hopebiol.com/standard/ldbqz.html 牛肉浸膏是很好的碳源和氮源，還含有酪蛋白，能指示蛋白酶產(chǎn)生菌的降解圈。 但是酵母膏、牛肉浸膏和蛋白胨是不一樣的，可能導(dǎo)致微生物生長(zhǎng)狀況不一樣。2116E培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)的微生物不一定能在酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基上良好生長(zhǎng)和產(chǎn)生降解圈，所以建議直接使用酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基。你想想，如果把2116E培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)的微生物全部都接種到酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基上，你得多做多少事情，還不如直接涂布在酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基平板上看水解圈的直接。如果你投稿論文，審稿人有可能會(huì)問(wèn)這個(gè)問(wèn)題，你可要預(yù)先做好思想準(zhǔn)備。當(dāng)然，如果你還有別的想法，必須用第一種方法，就就當(dāng)我沒(méi)說(shuō)過(guò)吧。 有個(gè)問(wèn)題需要注意，海水和模擬海水弄出來(lái)的營(yíng)養(yǎng)鹽或者人工海水都是不同的，所以培養(yǎng)基要用海水來(lái)配。海水采集的時(shí)候最好別靠近河、陸地和港口，以防鹽分不好和有油污等物污染，采集回來(lái)之后最好高溫高壓滅菌，殺死里面的微生物，不滅菌，放久了里面長(zhǎng)得花花綠綠的全是水藻，說(shuō)不定還有線(xiàn)蟲(chóng)之類(lèi)的惡心東西�？梢韵冗^(guò)濾再滅菌，滅菌過(guò)后放著不管，到配培養(yǎng)基的時(shí)候再過(guò)濾一次。當(dāng)然，如果不過(guò)濾也不滅菌，就那么放在實(shí)驗(yàn)室也行，那就美其名曰：陳海水，也是可以發(fā)文章的。 我用海水來(lái)篩選過(guò)淀粉酶產(chǎn)生菌，篩得到的個(gè)別微生物跟陸地上采集的樣品篩出來(lái)的看著不一樣，而且就是紅樹(shù)林泥土樣品，用海水和淡水來(lái)配置培養(yǎng)基，篩選出來(lái)的微生物生長(zhǎng)情況也是不同的。 于是高下立判—— |
3樓2011-04-06 00:37:37
冼亮淀粉酶
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
rainwander(金幣+2): 鼓勵(lì)交流~~~ 2011-04-06 23:31:05
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“我現(xiàn)在是用的海水配制的培養(yǎng)基，可是我們學(xué)校這邊的海水不是很清澈，用濾紙過(guò)濾還是有些渾濁�！� 做實(shí)驗(yàn)最嚴(yán)謹(jǐn)?shù)氖切枰ＷC可重復(fù)性，所以實(shí)驗(yàn)用的試劑藥品包括水都最好是能保持一致的，如果海水不清澈，那就說(shuō)明要么是有人類(lèi)活動(dòng)的痕跡了，是靠近港口或者內(nèi)陸河交匯之類(lèi)的，或者是城市污水排放造成，要么就是特別嚴(yán)重的洋流，不過(guò)基本不可能了，所以這種海水的成分可能不能保持恒定，所以你下一次采集海水樣品估計(jì)跟上一次的有一點(diǎn)不同。這種海水即使是離心之后能確保非常澄清，那也不應(yīng)該用。成分保持恒定的海水應(yīng)該是在不靠近陸地，人類(lèi)活動(dòng)不太頻繁的地方采集的，有SCI文章用的就是在海面以下多少米采集的，而且記錄經(jīng)緯度。當(dāng)然，如果你不是要求那么嚴(yán)謹(jǐn)，就不用這樣做，但是假如是想投稿SCI論文，那么就要思考這個(gè)問(wèn)題，因?yàn)閷徃迦丝赡軙?huì)問(wèn)這個(gè)關(guān)于實(shí)驗(yàn)重復(fù)性的問(wèn)題，編輯倒是不會(huì)問(wèn)的。其實(shí)實(shí)際操作起來(lái)也不算太難的，因?yàn)槭强亢５牡胤�，不說(shuō)客輪，漁船也是有的，漁船作業(yè)的地方一般不靠岸的，就是人類(lèi)活動(dòng)較少的地方，人類(lèi)活動(dòng)太頻繁的地方魚(yú)類(lèi)不多，被嚇跑了，你就跟他們聯(lián)系好，帶點(diǎn)酒菜上去嘮嗑一下，實(shí)在不行就出點(diǎn)錢(qián)當(dāng)是船票就搞定了，記得帶上學(xué)生證，不要被懷疑成偷魚(yú)的，帶上裝海水的桶罐，繩子船上如果有就不用帶。用繩子系好鐵桶，沉下去，再拉上來(lái)，這樣就沒(méi)有漁船的油污了。 “離心一下是很清澈，但這樣會(huì)不會(huì)把一些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)除去了” 離心只是把一些懸濁物離心下來(lái)而已，即使不離心，用這樣的海水來(lái)配置培養(yǎng)基，滅菌之后還是渾濁的。還是上面說(shuō)的，搭個(gè)漁船去采集海面下的海水，就不會(huì)渾濁了。離心不會(huì)把營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)去掉的，而且你要海水的原因是需要里面的各種紛繁復(fù)雜的鹽，營(yíng)養(yǎng)物在配置培養(yǎng)基的時(shí)候會(huì)自己加進(jìn)去的。盡量采集成分比較恒定的海水，搭個(gè)漁船去采集海面下的海水，有機(jī)物污染比較少，成分比較恒定。 “還有就是我用酪蛋白瓊脂篩選出來(lái)的菌株，在不同的平板上很可能篩選到的是同一種菌，我怎么鑒定它們是不是同一種？我看了一些文章說(shuō)從海水中分離出來(lái)多少多少株菌，其中有多少株有什么什么酶活性，我是要對(duì)我分離出來(lái)的每個(gè)菌都進(jìn)行鑒定嗎？” 首先需要區(qū)分“同一種菌”和“菌株”的概念，“種”是分類(lèi)學(xué)上的概念，界門(mén)綱目科屬種亞種變種；“株”不是分類(lèi)學(xué)上的概念，帶有很大人為的意義。比如說(shuō)我篩選得到一株“真菌菌株”命名為“真菌1-95”，經(jīng)過(guò)ITS序列和形態(tài)學(xué)鑒定之后，發(fā)現(xiàn)是屬于青霉屬，可能為嗜松青霉（可以看我的已授權(quán)專(zhuān)利）。在這個(gè)專(zhuān)利里，“種”為“青霉屬嗜松青霉種”，“菌株”為“青霉1-95”。當(dāng)然，很多人篩選得到的微生物可以在分類(lèi)學(xué)上隸屬于同一種菌，這些微生物在分類(lèi)學(xué)上是相同的，但可以被他們的擁有者命名為不同的名稱(chēng)，就是屬于不同實(shí)驗(yàn)室的不同的“菌株”。雖然屬于同一種菌，但是它們的基因組可能會(huì)稍有不同，所產(chǎn)的酶或者酶的性質(zhì)也會(huì)有不同的。 在不同的平板上生長(zhǎng)出來(lái)的微生物是同一種菌的情況是絕對(duì)可以存在的，而且大多數(shù)情況下都是這樣的，當(dāng)然你也不必全都鑒定，那樣確實(shí)很花費(fèi)時(shí)間金錢(qián)，先結(jié)合實(shí)驗(yàn)室需要，你到底需要什么樣的菌，什么樣的蛋白酶？先從菌和酶的特性入手篩選，偏酸偏堿中性？形態(tài)上一樣的菌可能是不同的種，也可能產(chǎn)酶情況不一樣，需要結(jié)合再深一層的要求來(lái)篩選，而不要看著一大批菌長(zhǎng)得像就只保留其中的某一個(gè)，那樣就不是篩選了。先問(wèn)清楚導(dǎo)師，接下來(lái)需要什么樣的菌什么樣的酶，不然就留下一大堆平板不知道下一步怎么做，丟也不是，不丟也不是，還礙地方。 至于文章里說(shuō)篩選得到多少菌株，這也不是嚴(yán)謹(jǐn)?shù)谋硎龇绞�，�?yán)謹(jǐn)?shù)膽?yīng)該是說(shuō)篩選得到多少株菌，它們分別產(chǎn)什么酶，隸屬于什么屬，不一定要到種，但屬是應(yīng)該到的。我覺(jué)得你說(shuō)的那篇可能是國(guó)內(nèi)的文章。 直接在2116E里面加酪蛋白應(yīng)該是可以的。 |
12樓2011-04-06 19:56:09
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[考研] 土木第一志愿276求調(diào)劑，科研和技能十分豐富，求新興方向的導(dǎo)師收留 +3 | 土木小天才 2026-03-12 | 3/150 |
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[考研] 一志愿山大07化學(xué) 332分 四六級(jí)已過(guò) 本科山東雙非 求調(diào)劑！ +3 | 不想理你 2026-03-12 | 3/150 |
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[考研] 289求調(diào)劑 +3 | 李政瑩 2026-03-12 | 3/150 |
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[考研] 290求調(diào)劑 +3 | ADT 2026-03-13 | 3/150 |
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[考博] 2026年博士申請(qǐng) +3 | QwQwQW10 2026-03-11 | 3/150 |
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