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[交流]
【求助/交流】分離產蛋白酶菌株
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我想從海水中分離產蛋白酶的菌株，現在有兩個方案，不知道哪個更合理。 1、將不同稀釋度的海水涂布在2116E培養(yǎng)基，先從海水中分離出不同的菌株，然后將這些菌株分別點種于酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基上，測量菌落直徑以及透明圈直徑，最后對分泌蛋白酶的菌株進行鑒定。 2、直接將不同稀釋梯度的海水涂布于酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基，測量菌落直徑以及透明圈直徑，對菌株進行鑒定。 這兩個方法哪個寫論文的時候更合理？ 我現在是用的海水配制的培養(yǎng)基，可是我們學校這邊的海水不是很清澈，用濾紙過濾還是有些渾濁，離心一下是很清澈，但這樣會不會把一些營養(yǎng)物質除去了？還有就是我用酪蛋白瓊脂篩選出來的菌株，在不同的平板上很可能篩選到的是同一種菌，我怎么鑒定它們是不是同一種？我看了一些文章說從海水中分離出來多少多少株菌，其中有多少株有什么什么酶活性，我是要對我分離出來的每個菌都進行鑒定嗎？那樣工作量會很大。 [ Last edited by nancyyazi on 2011-4-6 at 19:25 ] |
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nancyyazi(金幣+1):謝謝參與
nancyyazi(金幣+10): 2011-04-06 17:55:36
rainwander(金幣+2, EPI+1): 鼓勵交流~~~獎勵一下~ 2011-04-06 23:30:20
nancyyazi(金幣+1):謝謝參與
nancyyazi(金幣+10): 2011-04-06 17:55:36
rainwander(金幣+2, EPI+1): 鼓勵交流~~~獎勵一下~ 2011-04-06 23:30:20
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要知道用哪種方法，就首先要知道篩選的原理。蛋白酶是細胞必需的，每種生物都會產生，用于降解自身鈍化的蛋白質，所以就要看你需要的蛋白酶產生菌是怎樣的微生物了，或者說你需要微生物來產生具有怎樣的特性的蛋白酶。 撇開這個，先說說2116E和酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基的配方。我在網上找到這兩個配方： 2116E培養(yǎng)基：http://wenku.baidu.com/view/0ae2124c767f5acfa1c7cdf3.html 含有酵母膏和蛋白胨，都是很好的碳源和氮源，但是不能指示蛋白酶產生菌的降解圈 酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基：http://www.hopebiol.com/standard/ldbqz.html 牛肉浸膏是很好的碳源和氮源，還含有酪蛋白，能指示蛋白酶產生菌的降解圈。 但是酵母膏、牛肉浸膏和蛋白胨是不一樣的，可能導致微生物生長狀況不一樣。2116E培養(yǎng)基上能生長的微生物不一定能在酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基上良好生長和產生降解圈，所以建議直接使用酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基。你想想，如果把2116E培養(yǎng)基上能生長的微生物全部都接種到酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基上，你得多做多少事情，還不如直接涂布在酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基平板上看水解圈的直接。如果你投稿論文，審稿人有可能會問這個問題，你可要預先做好思想準備。當然，如果你還有別的想法，必須用第一種方法，就就當我沒說過吧。 有個問題需要注意，海水和模擬海水弄出來的營養(yǎng)鹽或者人工海水都是不同的，所以培養(yǎng)基要用海水來配。海水采集的時候最好別靠近河、陸地和港口，以防鹽分不好和有油污等物污染，采集回來之后最好高溫高壓滅菌，殺死里面的微生物，不滅菌，放久了里面長得花花綠綠的全是水藻，說不定還有線蟲之類的惡心東西�？梢韵冗^濾再滅菌，滅菌過后放著不管，到配培養(yǎng)基的時候再過濾一次。當然，如果不過濾也不滅菌，就那么放在實驗室也行，那就美其名曰：陳海水，也是可以發(fā)文章的。 我用海水來篩選過淀粉酶產生菌，篩得到的個別微生物跟陸地上采集的樣品篩出來的看著不一樣，而且就是紅樹林泥土樣品，用海水和淡水來配置培養(yǎng)基，篩選出來的微生物生長情況也是不同的。 于是高下立判—— |
3樓2011-04-06 00:37:37
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