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chengjg木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【討論】苯酚硫酸法交流 已有17人參與
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| 我做苯酚硫酸法測(cè)定多糖，前幾天硫酸用完了，今天買了一瓶新的，可是做實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)用剛買的硫酸做時(shí)空白都是深紅色的樣品顏色更深，沒法做，稀釋十倍才能有差別，請(qǐng)問一下大家又沒遇到這樣情況，還是我買的硫酸出問題了？ |
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yu27317961
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樹樹8013(金幣+1, 食品EPI+1): 謝謝老朋友的詳細(xì)解答。 2011-04-18 22:57:17
sweety: 回帖置頂 2011-12-30 09:35:51
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sweety: 回帖置頂 2011-12-30 09:35:51
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首先，要確定你檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線是不是準(zhǔn)確的，主要是葡萄糖的含量 操作的時(shí)候有幾條你需要注意的，這些對(duì)你的檢測(cè)結(jié)果影響極大 1、苯酚需要重蒸，配制的苯酚溶液需要妥善保存。 2、樣品檢測(cè)的時(shí)候，向樣品中加了苯酚溶液需要迅速搖勻，加入硫酸 基本操作：硫酸沿壁加，最好能旋轉(zhuǎn)比色管，讓硫酸能均勻的沿壁流下。 3、加完硫酸需要立即搖勻，前提是塞子要配套，不怕燙 熱、冷水浴，要準(zhǔn)確。 空白的顏色很深，說明你的空白中的苯酚被氧化了 深紅是醌（苯酚氧化生成）的顏色 顏色過深的話說明你的酚的難度過大，一般是5% 但是沒遇到你說的那么嚴(yán)重，不是深紅色的 做的好的時(shí)候顏色很淺，顏色深點(diǎn)也有肯能。 不是你買的硫酸的問題，是苯酚或你添加硫酸后苯酚全部被氧化的原因。 |
5樓2011-04-15 16:58:16
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首先，要確定你檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線是不是準(zhǔn)確的，主要是葡萄糖的含量 操作的時(shí)候有幾條你需要注意的，這些對(duì)你的檢測(cè)結(jié)果影響極大 1、苯酚需要重蒸，配制的苯酚溶液需要妥善保存。 2、樣品檢測(cè)的時(shí)候，向樣品中加了苯酚溶液需要迅速搖勻，加入硫酸 基本操作：硫酸沿壁加，最好能旋轉(zhuǎn)比色管，讓硫酸能均勻的沿壁流下。 3、加完硫酸需要立即搖勻，前提是塞子要配套，不怕燙 熱、冷水浴，要準(zhǔn)確。 空白的顏色很深，說明你的空白中的苯酚被氧化了 深紅是醌（苯酚氧化生成）的顏色 顏色過深的話說明你的酚的難度過大，一般是5% 但是沒遇到你說的那么嚴(yán)重，不是深紅色的 做的好的時(shí)候顏色很淺，顏色深點(diǎn)也有肯能。 不是你買的硫酸的問題，是苯酚或你添加硫酸后苯酚全部被氧化的原因。 |
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vivian13
6樓2011-04-16 06:47:03
chengjg
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4樓2011-04-15 13:42:12
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你說的這種現(xiàn)象的確很常見，即使同一個(gè)人操作，2天檢測(cè)同一個(gè)樣品的結(jié)果也有很大的差距。 硫酸在本檢測(cè)方法中的作用是水解多糖，但是高濃度的硫酸也有很強(qiáng)的氧化性，脫水性，試驗(yàn)檢測(cè)的誤差在硫酸這塊的有很大。 苯酚在檢測(cè)中試起到與醛、酮糖結(jié)合顯色的作用 試驗(yàn)操作中苯酚被氧化顯色，肯定是增大檢測(cè)結(jié)果。 但是若果苯酚被氧化，則無法檢測(cè)多糖是否全部參與顯色，結(jié)果至少是低于實(shí)際值的。 兩種情況一加一減，最終的結(jié)果很難說 樣品+蒸餾水，+苯酚（迅速 搖勻），+濃硫酸（迅速搖勻） 相信你在檢測(cè)的時(shí)候也遇到了，硫酸不同加法的不同顯色結(jié)果 沿壁--硫酸沉降在底部，可以很明顯的看見顯色是從不同密度的界面開始生成的 沿壁+旋轉(zhuǎn)比色管---控制硫酸添加速度，可以看到顏色是從比色管壁開始生成，逐漸向中間生成 我個(gè)人就覺得旋轉(zhuǎn)比色管沿壁加時(shí)，同一位置硫酸濃度增加相對(duì)來說較慢，避免了硫酸那多增加過快而增大了其氧化性的副作用。 另外，比色管選用25ml的比10ml的要好些吧，降低液面高度�？梢院芸斓幕靹驑悠贰� [ Last edited by yu27317961 on 2011-4-19 at 09:19 ] |
8樓2011-04-19 09:17:18
chengjg
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10樓2011-04-20 22:59:43
wujia115
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chengjg
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