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硫酸咔唑法與硫酸苯酚法的區(qū)別？
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請教各位蟲友，硫酸咔唑法和硫酸苯酚法在測多糖含量時的原理和計算方式有什么區(qū)別��？ 1.看文獻(xiàn)和資料有的說硫酸咔唑法測的是多糖中酸性成分的含量，而硫酸苯酚法測的是總糖的含量，這兩種方法反映在原理上到底有什么區(qū)別呢？ 2.是不是酸性糖在硫酸作用下水解成單糖，然后再分解成含有-COOH基團(tuán)的糠醛，此糠醛能與咔唑反應(yīng)生成紫紅色的化合物而顯色，那么其余不含-COOH的糖部分，盡管最后也生成了糠醛，但是這個糠醛基團(tuán)上因為沒有-COOH而無法與咔唑反應(yīng)顯色呢？ 3.那么硫酸苯酚法之所以能測總糖的含量，是不是因為不管酸性中性的多糖它們水解成單糖后最后都分解成糠醛，不論這個糠醛上帶什么樣的基團(tuán)都能跟苯酚發(fā)生酚醛縮合反應(yīng)生成橙黃色化合物而在~490nm有吸收呢？ 4.對于硫酸咔唑法所測酸性多糖的含量，我對于文獻(xiàn)的表述理解不是很清晰，請問是指酸性多糖整體的含量還是僅僅是指酸性多糖中糖醛酸部分的含量呢？比如下面這個多糖（結(jié)構(gòu)見下圖）以葡萄糖醛酸作標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后按照硫酸咔唑法的步驟測得這個多糖的吸光度A，通過曲線方程Y=aX+b，算出來的含量直接就是這個多糖的含量還是僅僅是這個多糖中葡萄糖醛酸的含量呢？求教！ 5.還有個問題就是看有的文獻(xiàn)提到過在計算糖含量的時候，通過標(biāo)曲得到的結(jié)果好像并不是真實的結(jié)果，因為所用葡萄糖或者葡萄糖醛酸當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)曲反映出來的結(jié)果跟純的多糖當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品是不一樣的，真實的結(jié)果應(yīng)該再這個的基礎(chǔ)上乘與一個換算系數(shù)，而這個換算系數(shù)通常是用純的多糖（或者已知純度的多糖）通過實驗的測得的，那除了實驗測得的話，請問大家能不能通過多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)分析其單糖組成及其比例然后理論計算出其換算系數(shù)呢？可能不是很精確，但能否粗略得出呢？ 真誠求教大家，希望可以互相交流，共同進(jìn)步！ |
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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樓主這個問題很好，也很有深度。本人目前也在糾結(jié)這個問題，衡量一個多糖的豐富到底是用糖醛酸還是用苯酚硫酸法測定的總糖來表示 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2016-05-19 01:10:13
簡單回復(fù)
2012-07-14 10:46
回復(fù)
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