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[交流]
【求助/交流】不產(chǎn)孢的真菌如何計算接種量
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| 想利用搖瓶發(fā)酵獲取真菌代謝物的最佳發(fā)酵條件，但目標菌非產(chǎn)孢真菌，如何確定接種量！ |
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7樓2011-04-16 20:29:45
8樓2011-04-19 09:52:37
帖子別沉了，樓上幾位的方法學(xué)習(xí)了，還有別的好方法嗎？期待啊！ 9樓2011-04-23 16:38:49
10樓2011-04-25 20:59:13
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木薯淀粉液化醪的成分也是挺復(fù)雜的，是由木薯淀粉粉碎之后過篩、調(diào)漿、加入耐高溫alpha淀粉酶、高溫蒸煮而得。耐高溫alpha淀粉酶是由芽孢桿菌所產(chǎn)，最適作用溫度超過90度，不是生淀粉酶，不能降解生淀粉。木薯生淀粉晶體在50度開始被破壞，隨著溫度升高，糊化速度加快，同時耐高溫alpha淀粉酶活力上升。在蒸煮的過程中酶逐漸失活，最終得到液化醪。液化醪主要含有的糖的成分隨淀粉酶的降解程度而異，在酒精生產(chǎn)中的液化醪主要含有麥芽寡糖、麥芽糖和少量葡萄糖。木薯淀粉的淀粉含量隨木薯品種和季節(jié)而異，鮮木薯含量一般為30%，干品（約含10%水分）一般為70%甚至更高，剩下的都是纖維素木質(zhì)素之類的不能利用的東西。離心也是可行的，但是有兩個問題要注意： 1、會把一部分糖分也去掉，但是由于糖分都已經(jīng)是可溶解了，所以去掉的不多 2、在中試的時候難操作，量多難操作，中試的發(fā)酵罐可能會有50升甚至兩百升，需要的液化醪較多。 好處也是有的，可以測定生物量。生物量是一項輔助數(shù)據(jù)，可以獲得就最好也獲得，可以看看產(chǎn)量的變化是否因為生物量的變化引起的。但是凡事都應(yīng)該以產(chǎn)量為唯一可比較的指標。還有一個好處是方便產(chǎn)物的提取，渣多不好提取，但是如果只是優(yōu)化一下實驗條件又不用提取的，就別考慮這么多了。 所以我覺得離心是最好的，有的東西離心去不掉，就過濾。但是如果要求不高，那就算了。 |
16樓2011-04-28 14:59:38
17樓2011-04-28 15:18:10
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18樓2011-04-28 15:21:12
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不產(chǎn)孢子的絲狀真菌...第一次聽說，LZ能具體說下么... LZ的問題是不是其實有兩個 1：接種量無法確定的問題. 2：發(fā)酵過程中測菌體重量的問題 接種量的問題，其實要看LZ要求的精度有多高了。要是不高的話，個人覺得打餅就可以了，稱重感覺比較容易染菌。 現(xiàn)在我做發(fā)酵是先挑一環(huán)到兩環(huán)菌絲到種子培養(yǎng)基中，活化之后再接發(fā)酵，接種量是種子培養(yǎng)基的10%或5%，這樣保證一批是相同濃度. 其實最終涉及到的還是要求精度的問題，因為無論采取哪種方法，有些變量都無法控制，譬如打餅的位置，接種菌絲，以及其他一些影響. 稱量菌體的問題，沒想到好的辦法，不過有人幫忙解決了，嘿嘿. |
19樓2011-04-28 17:27:13
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我和LZ是遇到同樣的問題，也和LZ交流過，我替LZ解釋一下吧，不是不產(chǎn)孢子，而是孢子很難形成，而且產(chǎn)在載孢體里，無法以孢子數(shù)作為接種量的量化指標。我有3個問題： 1、如果采用打餅的話如何量化？是否可以說成100mL發(fā)酵培養(yǎng)基加入2個、3個菌餅？ 2、接種量是種子培養(yǎng)基的10%或5%作何解？是指含菌絲的種子培養(yǎng)基占發(fā)酵培養(yǎng)基的10%或5%嗎？或是以10%或5%的種子培養(yǎng)基接入發(fā)酵培養(yǎng)基。但如果菌絲成團而不分散均勻的話，這個方法似乎不準確啊。 3、中試發(fā)酵罐為50升，此時如何確定接菌量？ 謝謝cc1000ml 以及樓上各位。  |
20樓2011-04-29 01:06:10
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1 個人想法： 打餅所謂的量化（接2個或者3個菌餅）只能是相對的，只能保證同一批次的相同，因為平板由于接種等因素的影響，不可能完全相同，所謂的打餅量化應(yīng)該比較適用于對量化指標要求不高的情況下. 2 10%或5%的接種量是針對種子培養(yǎng)基的體積而言，例如：100ML的種子培養(yǎng)基，每個發(fā)酵瓶接10ML. 涉及到接種量是否一致的問題，不知道你們的菌是什么情況，我一般是拋棄菌絲體，直接取上清...這樣就能保證吸到的是均勻的孢子液。不過這個針對這種孢子很難形成的菌 是否有很大困難. 3 現(xiàn)在沒有做過上罐實驗 所以不清楚了哈 |
21樓2011-04-29 09:00:54
22樓2011-04-29 09:18:20
23樓2011-04-29 09:23:16
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