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tmhua鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
無孢子真菌的保存方法
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本人最近分離到一些無孢子真菌，需要保存。但不知道哪種保存方法較為合適。以前用甘油保存，結(jié)果半年后發(fā)現(xiàn)有些轉(zhuǎn)出來活化不出來了。 求有做這方面的大蝦能幫幫我。  |
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促孢培養(yǎng)基的配方是 KH2PO4 1 g , KNO3 1 g ,MgSO4·7H2O 0.5 g ,KCl 0.5 g ,淀粉 0.2 g ,葡萄糖 0.2 g ,蔗糖 0.2 g ,瓊脂 15 g ,水1 000 mL。 http://www.zlunwen.com/pharmacological/clinicalmedicine/61833.htm 碳源和氮源都很少，有機物和無機物也很少，滲透壓很小，長不好的，產(chǎn)孢效果值得懷疑。碳源淀粉葡萄糖蔗糖加起來才0.06%，遠小于我用的2%，要是我是真菌，我就干脆絕食（這么點吃的還要我產(chǎn)仔，我又不能光能自養(yǎng)）。 |
8樓2011-07-05 17:49:46
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
rainwander(金幣+5, EPI+1): 回答的總是那么的詳細，贊一個 2011-07-04 22:11:10
tmhua(金幣+1): 是啊 孢子抗逆性好，我想弄出孢子來用甘油管或是牛奶管保存，可惜孢子出不來。用促孢培養(yǎng)基都沒有出來 2011-07-05 09:49:58
tmhua(金幣+4): 2011-08-02 11:04:06
rainwander(金幣+5, EPI+1): 回答的總是那么的詳細，贊一個 2011-07-04 22:11:10
tmhua(金幣+1): 是啊 孢子抗逆性好，我想弄出孢子來用甘油管或是牛奶管保存，可惜孢子出不來。用促孢培養(yǎng)基都沒有出來 2011-07-05 09:49:58
tmhua(金幣+4): 2011-08-02 11:04:06
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假如將真菌在斜面培養(yǎng)基上接種，等其生長起來之后，整枝試管放進去-80度，那么真菌的生命活動進入休眠，細胞內(nèi)部的水結(jié)晶形成冰晶，在再拿出來到常溫下的時候，冰晶復融，這個過程可能會對細胞器造成機械損傷，使真菌細胞生命力下降。所以在低溫保存時需要加入甘油或者其它物質(zhì)做保護劑。 這個回帖令我想起石蠟保存法，就是讓真菌生長起來之后加入液體石蠟覆蓋菌落，然后常溫或者低溫保存，我沒這樣做過，也不知道效果如何，但是這個方法在微生物實驗技術(shù)之類的書上有相關(guān)介紹。 我現(xiàn)在用的是低溫保存，用20%甘油作為保護劑，我比樓主幸運，我的菌絲是液體發(fā)酵搖瓶里得到的，那時候還沒有孢子，而半年后用平板來活化還是長得很好。不知道是不是樓主的甘油濃度出問題，還是某些真菌真的不適合這樣保存。 照理說孢子的抗逆性比菌絲強，如果有孢子，保存效果會好一些，我也試過有一株真菌在平板上長好之后放在4度半年之后接種不活的，當時后悔沒有早用甘油保存。真菌在不同的培養(yǎng)基上生長狀況會不同，換培養(yǎng)基可能會產(chǎn)孢子，就我的經(jīng)驗來說，PDA含有大量葡萄糖，很利于真菌生長，所以菌絲發(fā)達孢子稀疏，但如果換了一種培養(yǎng)基，情況可能會不同。我曾經(jīng)用幾種培養(yǎng)基來培養(yǎng)一株真菌，用來獲取大量孢子，結(jié)果PDA是效果最差的，不知道樓主有沒有試過換培養(yǎng)基。 |
6樓2011-07-04 19:55:55
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促孢培養(yǎng)基的配方是 KH2PO4 1 g , KNO3 1 g ,MgSO4·7H2O 0.5 g ,KCl 0.5 g ,淀粉 0.2 g ,葡萄糖 0.2 g ,蔗糖 0.2 g ,瓊脂 15 g ,水1 000 mL。 http://www.zlunwen.com/pharmacological/clinicalmedicine/61833.htm 碳源和氮源都很少，有機物和無機物也很少，滲透壓很小，長不好的，產(chǎn)孢效果值得懷疑。碳源淀粉葡萄糖蔗糖加起來才0.06%，遠小于我用的2%，要是我是真菌，我就干脆絕食（這么點吃的還要我產(chǎn)仔，我又不能光能自養(yǎng)）。開玩笑而已，不過既然這個培養(yǎng)基不能促進產(chǎn)孢，那還可以換用別的培養(yǎng)基，我曾經(jīng)摸索過一個真菌產(chǎn)孢子的培養(yǎng)基，一共試了PDA、PY、PY+TB、PY+麥麩、PDA+麥麩、麥麩，結(jié)果是菌絲發(fā)達程度從大到小為麥麩、PY+麥麩、PDA+麥麩、PDA、PY、PY+TB，但是產(chǎn)孢子能力從大到小為PY+麥麩、PY、PY+TB、麥麩、PDA+麥麩、PDA，我希望菌絲不要太發(fā)達，孢子多就行，所以效果由好到壞排序為PY、PY+TB、PY+麥麩、麥麩、PDA+麥麩、PDA。所以如果是不產(chǎn)孢子，可以先換幾種培養(yǎng)基，有可能就產(chǎn)了，促孢培養(yǎng)基不一定好，不一定說促孢就真能促孢，微生物很神奇的，不一定以為適合就真能適合。 |
9樓2011-07-05 18:07:59
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10樓2011-07-19 19:33:24
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