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suyinling木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】真菌提DNA的方法 已有8人參與
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| 除了研磨菌絲,有沒有簡便的方法,例如孢子液 |
土壤真菌 |
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CTAB法提取步驟: (1) 在7mL離心管中加入65℃預(yù)熱的抽提液2.5mL。 (2) 加入1g樣品液氮研磨,加入巰基乙醇50μL,上下震蕩,使蛋白質(zhì)變性沉淀, 65℃水浴1h,每隔10min顛倒混勻一次。 (3) 加入等體積(約3mL)的氯仿/異戊醇(24/1)混勻,除去蛋白質(zhì),4℃平衡離心,10000rpm,10min。 (4) 取上清(約2.5mL)到7mL管,加1/5體積(約0.5mL)65℃預(yù)熱的CTAB/NaCl混勻,加入2mL的氯仿/異戊醇(24/1)混勻,4℃平衡離心,10000rpm,10min。 (5) 取上清,加等體積(約3mL)的CTAB沉淀液,顛倒混勻。65℃水浴30min至沉淀可見。4℃平衡離心,10000 rpm,10min后小心去上清。 (6) 沉淀用TE(0.5mL)溶解,加入等體積(約0.5mL)的酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)抽提,4℃平衡離心,10000rpm,10min。 (7) 取上清加入2倍體積的無水乙醇(1mL),再加入1/10體積的NaAC (pH 5.2)約0.1mL。 (8) -20℃冰箱1h,4℃平衡離心,12000rpm,10min,棄上清,用70%酒精清洗2次,濾紙吸去多余水分,超凈臺吹干。 (9) 0.05mL TE溶解,-20℃保存。 |
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