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suyinling木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】真菌提DNA的方法 已有8人參與
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| 除了研磨菌絲，有沒有簡便的方法，例如孢子液 |
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 土壤真菌 |
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+3):good 2010-11-09 17:02:50
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dhd997(金幣+3):good 2010-11-09 17:02:50
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CTAB法提取步驟： (1) 在7mL離心管中加入65℃預(yù)熱的抽提液2.5mL。 (2) 加入1g樣品液氮研磨，加入巰基乙醇50μL，上下震蕩，使蛋白質(zhì)變性沉淀， 65℃水浴1h，每隔10min顛倒混勻一次。 (3) 加入等體積（約3mL）的氯仿/異戊醇(24/1)混勻，除去蛋白質(zhì)，4℃平衡離心，10000rpm，10min。 (4) 取上清（約2.5mL）到7mL管，加1/5體積（約0.5mL）65℃預(yù)熱的CTAB/NaCl混勻，加入2mL的氯仿/異戊醇(24/1)混勻，4℃平衡離心，10000rpm，10min。 (5) 取上清，加等體積（約3mL）的CTAB沉淀液，顛倒混勻。65℃水浴30min至沉淀可見。4℃平衡離心，10000 rpm，10min后小心去上清。 (6) 沉淀用TE（0.5mL）溶解，加入等體積（約0.5mL）的酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)抽提，4℃平衡離心，10000rpm，10min。 (7) 取上清加入2倍體積的無水乙醇（1mL），再加入1/10體積的NaAC （pH 5.2）約0.1mL。 (8) -20℃冰箱1h，4℃平衡離心，12000rpm，10min，棄上清，用70%酒精清洗2次，濾紙吸去多余水分，超凈臺(tái)吹干。 (9) 0.05mL TE溶解，-20℃保存。 |
2樓2010-11-09 14:31:43
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9樓2011-01-15 17:01:23
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