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夢(mèng)想起飛銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】抗性基因要表達(dá)，咋辦？ 已有3人參與
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最近又遇到一個(gè)問題，請(qǐng)求大家?guī)椭?br />
我需要四環(huán)素抗性基因，已經(jīng)在pBR322質(zhì)粒上找到了，但是只找到ORF，就是從ATG到TAA的這一段。但是我的目的是想要這段基因表達(dá)，那就還需要上游的啟動(dòng)子啊，SD序列，還有下游的終止子這些元件。不知道該怎么找到這些元件呢。我覺得應(yīng)該是在ATG的上游多擴(kuò)增一段序列，可是不知道到底要多長？還有下游終止子序列，在TAA之后多遠(yuǎn)的地方呢？這些應(yīng)該怎么確定��？？極度迷茫中…… 等待高手們解惑…… |
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3樓2011-04-15 23:04:25
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西瓜(金幣+4): 鼓勵(lì) 2011-04-16 00:01:01
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| PBR322質(zhì)粒的全序列應(yīng)該都有了吧？在這個(gè)質(zhì)粒上四環(huán)素抗性基因上可以表達(dá)的，所以它的啟動(dòng)子元件是完整的。一般啟動(dòng)子序列在起始密碼子上游幾十個(gè)bp，你若是擔(dān)心就擴(kuò)增一百多bp好了，夠用了。對(duì)于終止元件就不用考慮了，在序列內(nèi)部，轉(zhuǎn)錄會(huì)在終止密碼子處結(jié)束，即使不結(jié)束，翻譯的時(shí)候遇到終止密碼子，翻譯也會(huì)結(jié)束。 |
2樓2011-04-15 21:40:25
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4樓2011-04-16 10:06:29
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5樓2011-04-16 10:06:44
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