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[交流]
【求助/交流】抗性基因要表達(dá),咋辦? 已有3人參與
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最近又遇到一個(gè)問題,請求大家?guī)椭?br />
我需要四環(huán)素抗性基因,已經(jīng)在pBR322質(zhì)粒上找到了,但是只找到ORF,就是從ATG到TAA的這一段。但是我的目的是想要這段基因表達(dá),那就還需要上游的啟動(dòng)子啊,SD序列,還有下游的終止子這些元件。不知道該怎么找到這些元件呢。我覺得應(yīng)該是在ATG的上游多擴(kuò)增一段序列,可是不知道到底要多長?還有下游終止子序列,在TAA之后多遠(yuǎn)的地方呢?這些應(yīng)該怎么確定??極度迷茫中…… 等待高手們解惑…… |
| PBR322質(zhì)粒的全序列應(yīng)該都有了吧?在這個(gè)質(zhì)粒上四環(huán)素抗性基因上可以表達(dá)的,所以它的啟動(dòng)子元件是完整的。一般啟動(dòng)子序列在起始密碼子上游幾十個(gè)bp,你若是擔(dān)心就擴(kuò)增一百多bp好了,夠用了。對于終止元件就不用考慮了,在序列內(nèi)部,轉(zhuǎn)錄會(huì)在終止密碼子處結(jié)束,即使不結(jié)束,翻譯的時(shí)候遇到終止密碼子,翻譯也會(huì)結(jié)束。 |
專家顧問 (職業(yè)作家)
T.Shen
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