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tutufei

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我想做反轉(zhuǎn)錄，然后擴(kuò)增目的條帶，不知道RNA提得可以嗎？第一個(gè)泳道不知道為什么跟其他的不一樣？

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1樓 2011-04-17 22:32:22

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Originally posted by zhaohq1209 at 2011-04-18 14:25:16:
其實(shí)提取RNA的條件沒(méi)那么苛刻，在普通的通風(fēng)櫥里就可以操作，外源RNase的污染比較好消除，關(guān)鍵是破壁時(shí)的內(nèi)源降解。如果用trizol法就必須考慮trizol的量。

另外，相同的方法提取不同細(xì)菌的RNA效果也不一樣。 ...

再請(qǐng)教個(gè)問(wèn)題，細(xì)菌RNA做反轉(zhuǎn)錄時(shí)，引物怎么選擇，是選隨機(jī)引物嗎

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7樓2011-04-23 00:06:38

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wolfebst(金幣+1): 鼓勵(lì)多多交流 2011-04-18 08:11:57

引用回帖:

Originally posted by tutufei at 2011-04-17 22:32:22:
我想做反轉(zhuǎn)錄，然后擴(kuò)增目的條帶，不知道RNA提得可以嗎？第一個(gè)泳道不知道為什么跟其他的不一樣？

不知lz提取的是什么東東的RNA？

我提過(guò)細(xì)菌的total RNA。從lz的電泳圖來(lái)看，質(zhì)量不好。RIN值太低，表明降解嚴(yán)重。

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2樓2011-04-18 06:48:11

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rainwander(金幣+1, EPI+1): 相應(yīng)管理員號(hào)召，開(kāi)始加大EPI給予力度~ 2011-04-18 13:22:07

提取的大腸桿菌total RNA，可以用來(lái)做轉(zhuǎn)錄組分析的。大條帶應(yīng)該是小條帶亮度的兩倍最好，最差也得亮度差不多，對(duì)應(yīng)的數(shù)量差不多。

祝lz實(shí)驗(yàn)順利！

[ Last edited by zhaohq1209 on 2011-4-18 at 09:31 ]

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3樓2011-04-18 09:30:10

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Originally posted by zhaohq1209 at 2011-04-18 06:48:11:
不知lz提取的是什么東東的RNA？

我提過(guò)細(xì)菌的total RNA。從lz的電泳圖來(lái)看，質(zhì)量不好。RIN值太低，表明降解嚴(yán)重。

提的就是細(xì)菌的total RNA，沒(méi)辦法，實(shí)驗(yàn)室沒(méi)做過(guò)RNA，所以條件不好，這個(gè)電泳沒(méi)加變性劑

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4樓2011-04-18 13:17:02

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