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zhouxw1987鐵蟲 (初入文壇)
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新手提RNA，電泳圖看不懂
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今天第一次提RNA，用普通瓊脂糖凝膠1.6%，電壓為180V，跑了電泳圖，看不懂是啥意思，最下面那個很亮的地方是什么東西？是降解了么？但是又不像是拖帶��？請各位前輩指點指點，能用此RNA做反轉(zhuǎn)錄么？萬分感謝！![](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/edu/a1/ca/1528487_1324815338_320.jpg#opennewwindow\") 圖一、電泳5min時的圖片 ![](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/edu/a2/0b/1528487_1324815333_888.jpg#opennewwindow\") 圖二、電泳10min時的圖片 |
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dnaxxx
至尊木蟲 (小有名氣)
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3樓2011-12-26 07:09:40
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): Good！ 2011-12-26 11:44:04
zhouxw1987(金幣+2): ★★★很有幫助 2011-12-27 20:30:11
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首先你上樣量肯定有點多相對你此膠的點樣孔來說。你小孔的膠先測一下OD，上200-300ng就可以了，上多了就會跑成這樣。 其次你的電泳可能有點大，10min跑了那么遠，一般要了20-25min才能跑這樣的距離。電壓是以幾伏每厘米來說的，不是以電泳儀顯示的總電壓來說。電泳槽有10cm\20cm\30cm等等的規(guī)格，如果你是180v，則分別為18v/cm,9v/cm,6v/cm了，完全不同的概念。 最后，你的loading如果不是你點多了就是你的二甲苯青和溴酚蘭加多了，多到都有點影響判斷條帶了。6Xloading 你就按1：5跟你的樣品混混上就行了。新手最好也點個marker（DL2000） |
6樓2011-12-26 09:28:38
haiven
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): 180V確實偏高了。測OD是好方法，本人現(xiàn)在都直接測OD省略電泳了。 2011-12-28 12:52:32
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): 180V確實偏高了。測OD是好方法，本人現(xiàn)在都直接測OD省略電泳了。 2011-12-28 12:52:32
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RNA電泳不宜跑太高的電壓，畢竟不是PCR產(chǎn)物。這個在每個實驗室都會有個經(jīng)驗值的，多問問，或者自己多摸索一下。 然后上樣之前，對RNA定量一下，很方便的，用NanoDrop，1-2uL就可以了，同時還可以看出你的RNA的質(zhì)量如何。這方面的資料很多了，你上網(wǎng)隨便搜搜就找得到的。做實驗之前，要把這些原理和方法多了解，然后設(shè)計和計劃一下實驗怎么做，這樣實驗的效率也就高多了。 |
13樓2011-12-27 08:29:15
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
wanhscn(金幣+3): 鼓勵完整應(yīng)助 2011-12-27 21:21:39
wanhscn(金幣+3): 鼓勵完整應(yīng)助 2011-12-27 21:21:39
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基因組DNA 0.6% gel 4-5v/cm gDNA大，要慢慢跑出來才漂亮。 1-5kb DNA 1%gel 5-8v/cm 隨便跑跑即可 200-500bp 2% 約6v/cm 問題不大。 至于RNA電泳（普通瓊脂糖，非變性），因為怕它電泳時間過長，降解，所以感覺上電泳時間控制在30min以內(nèi)會比較好。 1-1.5%的膠都有人用， 7v/cm左右差不多，在溴酚蘭跑出來1-2cm。不同大小的點樣孔上不同的量（小孔建議200ng） 多跑幾次自己摸索摸索，找出自己最適合的條件。 |
9樓2011-12-26 11:21:06
我是小純潔
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2樓2011-12-25 20:48:10
4樓2011-12-26 08:19:37
zhouxw1987
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5樓2011-12-26 08:57:17
7樓2011-12-26 10:29:48
5xiaosh
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8樓2011-12-26 10:46:32
10樓2011-12-26 11:23:08
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